VF 647 Click-iT EdU 通用型細(xì)胞增殖檢測試劑盒
MCE 國際站:VF 647 Click-iT EdU Universal Cell Proliferation Detection Kit
品牌:MedChemExpress (MCE)
存儲條件: -20°C ,, 3 年避光保存,避免反復(fù)凍融,。
簡介:MCE VF 647 Click-iT EdU 通用款細(xì)胞增殖檢測試劑盒含有 EdU 及 VF 647 Azide 染料試劑,,另配套含有點擊化學(xué)所需的催化劑,、緩沖液,從而實現(xiàn)簡單,、快速,、高效、靈敏地細(xì)胞增殖檢測,。
概述:細(xì)胞增殖能力的檢測對評估細(xì)胞活性,、基因毒性和抗腫瘤藥物效果等至關(guān)重要.。準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖檢測方法為直接檢測細(xì)胞中新 DNA 的合成,,傳統(tǒng)的 BrdU (5-Bromo-2'-deoxyuridine) 法步驟繁多,,且需要使用 BrdU 抗體,影響因素較多,,穩(wěn)定性較差,。EdU (5-Ethynyl-2'deoxyuridine) 法是一種在 BrdU 法基礎(chǔ)上升級換代的新方法,只需多聚甲醛固定和 Triton X-100 促滲就可以使檢測試劑進(jìn)入細(xì)胞,,少量的疊氮化染料通過點擊化學(xué)反應(yīng) (Click Chemistry) 即可快速有效地標(biāo)記出整合的 EdU,。MedChemExpress VF 647 Click-iT EdU 通用款細(xì)胞增殖檢測試劑盒含有 EdU 及 VF 647 Azide 染料試劑,另配套含有點擊化學(xué)所需的催化劑,、緩沖液,,從而實現(xiàn)簡單、快速,、高效,、靈敏的細(xì)胞增殖檢測。除檢測細(xì)胞增殖外,,試劑盒中額外提供的 Hoechst 33342 ,,可用于細(xì)胞周期分析。本試劑盒適用于熒光顯微鏡,、激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞儀等檢測,,對于 96 孔板檢測可檢測 100 孔樣
描述:
MCE VF 647 Click-iT EdU 通用細(xì)胞增殖檢測試劑盒含有 EdU 和 VF 647 疊氮化物染料,以及點擊化學(xué)所需的催化劑和緩沖液,。它可用于簡單,、快速、高效和靈敏的細(xì)胞增殖檢測,。試劑盒中還提供 Hoechst 33342 用于細(xì)胞周期分析,。該試劑盒適用于熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡或流式細(xì)胞術(shù)檢測,。100T 指檢測 96 孔板的 100 個樣本,。
操作說明:細(xì)胞培養(yǎng)取對數(shù)生長期細(xì)胞,以每孔 4 × 103 - 1 × 105 細(xì)胞(可根據(jù)細(xì)胞大小,、生長速度以及實驗處理的具體要求調(diào)整細(xì)胞數(shù)量和密度)接種于 96 孔板中,,培養(yǎng)至正常生長階段藥物處理:根據(jù)實驗需要進(jìn)行各種藥物處理或者其他刺激處理等EdU 標(biāo)記1) 用細(xì)胞培養(yǎng)基按一定比例稀釋 EdU 溶液至合適濃度后加入細(xì)胞中,,混勻;設(shè)置不加 EdU 處理的陰性對照組,。注:對于 A594,、 HeLa 和 NIH/3T3 等貼壁細(xì)胞,推薦 EdU 的終濃度為 10 µM ,。但細(xì)胞類型,、培養(yǎng)液種類、細(xì)胞密度,、細(xì)胞增殖速度等多方面因素會影響 EdU 摻入到細(xì)胞中的量,,因此初次使用時建議設(shè)置 EdU 濃度梯度。如果之前使用過 BrdU 進(jìn)行實驗,,則可以參考 BrdU 濃度作為 EdU 的濃度,。2) 細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育 2 h ,,去除培養(yǎng)基,。注:最佳孵育時間的長短取決于細(xì)胞生長速率,通常宜孵育細(xì)胞周期 10% 左右的時間,。對于常見的哺乳動物細(xì)胞如 HeLa,、 3T3、 HEK293 等,,細(xì)胞周期大約 18 - 25 h ,,孵育時間一般在 2 h 左右。人胚胎細(xì)胞的細(xì)胞周期約 30 min ,,推薦孵育 5 min ,;酵母細(xì)胞的細(xì)胞周期約 3 h ,推薦孵育 20 min ,;神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞周期約 5 d,, 推薦孵育 24 h 。EdU 濃度與孵育時間相關(guān),,短時間孵育 (< 2 h) 宜采用高濃度,,如: 10 - 50 μM ; 長時間孵育 (> 24 h ) 宜采用低濃度,,如: 1 - 10 μM,。細(xì)胞固定化注:對于需要做表面抗原標(biāo)記的實驗,可以考慮在完成 EdU 孵育后,,以洗滌液洗滌細(xì)胞 2 次,,在細(xì)胞固定化之前進(jìn)行。1) 以 PBS 清洗細(xì)胞兩次,,每次 3 - 5 min ,,以除去未摻入 DNA 的 EdU 殘留,,貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強度。注:離心條件可參考特定細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗進(jìn)行設(shè)置,。2) 每孔加入 50 μL 細(xì)胞固定液,,室溫固定 30 min ,去除固定液,。注:低濃度的多聚甲醛固定液有利于細(xì)胞結(jié)構(gòu)的保持,,但也可采用其他方式進(jìn)行細(xì)胞固定;固定處理后細(xì)胞沉降系數(shù)發(fā)生變化,,需根據(jù)細(xì)胞的情況調(diào)整離心力,,可參考該細(xì)胞在其他實驗中通透后的離心條件。3) 每孔加入 50 μL 2 mg/mL 甘氨酸溶液,,室溫孵育 5 min ,,去除甘氨酸溶液。注:此步驟的目的是中和過量的醛基,,保證染色反應(yīng)體系,。當(dāng)采用非醛類固定劑進(jìn)行細(xì)胞固定時可酌情省略此步驟。4) 每孔加入 100 μL 洗滌液洗滌細(xì)胞 2 次,,每次 3 - 5 min ,,去除洗滌液。5) 每孔加入 100 μL 滲透劑,,室溫孵育 10 min ,,去除滲透劑。注:必要時可延長通透時間增加細(xì)胞膜通透性EdU 檢測注:本參考步驟針對 96 孔板每孔 100 μL 的工作液來進(jìn)行,,用戶可以根據(jù)自己的樣本情況調(diào)整用量,。1) 依據(jù)下表準(zhǔn)備 Click-iT 工作液。注:Click-iT 工作液須在配制后 15 min 內(nèi)使用,。2) 每孔加入 100 μL 洗滌液洗滌細(xì)胞 2 次,。3) 每孔加入 100 μL Click-iT 工作液,均勻覆蓋細(xì)胞,,室溫避光孵育 30 min ,,去除 Click-iT 工作液。4) 每孔加入 100 μL 洗滌液洗滌細(xì)胞 2 次,,去除洗滌液,,每孔加入 100 μL 保存液保持細(xì)胞濕潤。如其他無特別要求,,即可進(jìn)行拍照分析或流式細(xì)胞儀檢測,。DNA 復(fù)染或細(xì)胞內(nèi)抗原標(biāo)記 ( 可選步驟 )DNA 復(fù)染1) 用 PBS 將 Hoechst 33342 稀釋 2000 倍,2 - 8°C 避光保存,。2) 每孔加 100 μL Hoechst 33342 溶液 (1 ×) ,,室溫避光孵育 30 min ,,去除染色反應(yīng)液。3) 每孔用 100 μL PBS 洗滌細(xì)胞 1 - 3 次,。細(xì)胞內(nèi)抗原標(biāo)記1) 加入抗體工作液,,混勻。2) 避光條件下,,以合適的溫度及時間孵育抗體,。檢測及分析1) 建議染色完成后立即進(jìn)行熒光顯微鏡拍照觀察或流式細(xì)胞儀檢測;如果條件限制,,請避光 4°C 濕潤保存待測,,但不應(yīng)超過 3 d 。若為細(xì)胞爬片或涂片,,可使用抗熒光淬滅封片機封片后 4°C 條件下避光保存以提高保存效果,。2) 進(jìn)行熒光顯微鏡觀察增殖細(xì)胞的染色情況,可選擇進(jìn)行 Hoechst 復(fù)染再檢測,。Hoechst 33342 為藍(lán)色熒光,,最大激發(fā)波長為 350 nm ,最大發(fā)射波長為461 nm ,。 VF 647 Azide 為紅色熒光,,最大激發(fā)波長為 650 nm ,,最大發(fā)射波長為 670 nm ,。3) 流式檢測的細(xì)胞數(shù)量建議盡量能達(dá)到百萬級,若細(xì)胞數(shù)量較少,,檢測的細(xì)胞數(shù)量可調(diào)整為十萬級起始進(jìn)行實驗,。對于細(xì)胞得率過少(剛到萬級)的情況,可適當(dāng)減少步驟 5 (3) 中的清洗次數(shù),。4) 由于流式細(xì)胞儀檢測比較靈敏,,可根據(jù)細(xì)胞類型和實際染色情況對 VF 647 Azide 的使用量進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整
注意事項:1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底,再進(jìn)行后續(xù)實驗,。2. 熒光染料均存在淬滅問題,,實驗操作時請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅,。3. Click-iT Additive 配制成溶液后請注意適當(dāng)分裝,, -20°C 保存。如溶解后有白色物質(zhì)析出,,請上下顛倒數(shù)次,,待其溶解后使用。 4. 本品會影響 GFP,、 RFP,、 mCherry 等熒光蛋白的熒光,,對于熒光蛋白如 GFP、 TC-FLAsH 和 TC-ReAsH 類試劑,,需要在 Click 反應(yīng)前進(jìn)行反應(yīng)和檢測,。由于 Phalloidin 不兼容 Click 反應(yīng),推薦使用 Tubulin-Tracker Red (HY-131010) 進(jìn)行細(xì)胞微管的檢測,。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,。6. 為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作
銷售產(chǎn)品:7-Dehydrocholesterol | 1-Palmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine | R-IMPP | Glutamate dehydrogenase | Tween 20 | Cephalothin | Ivuxolimab | Pomalidomide-C5-azide | Diazoxide | Mupirocin
Trending products:Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
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