組織線粒體分離試劑盒
MCE 國際站：Mitochondria Isolation Kit for Tissue
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件： -20oC 保存一年
簡介：MCE 組織線粒體分離試劑盒可快速分離動物組織的線粒體，且線粒體純度較高,，絕大多數(shù)具有完整的內(nèi)外膜及生理功能,。
概述：線粒體是真核細(xì)胞中產(chǎn)生能量的主要部位，具有雙層膜結(jié)構(gòu),。制備線粒體的關(guān)鍵在于確保線粒體的完整性和純度,。通常先低速離心去除細(xì)胞核及細(xì)胞碎片,，再高速離心獲得線粒體。MCE 組織線粒體分離試劑盒可快速分離動物組織的線粒體,，且線粒體純度較高,，絕大多數(shù)具有完整的內(nèi)外膜及生理功能。提取的線粒體也可被相應(yīng)裂解液裂解后得到線粒體蛋白,，用于 SDS-PAGE,、WB、雙向電泳等蛋白分析,。 此外,，本試劑盒也可用于提取不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白。本試劑盒可檢測 50-100 個樣品,，建議每個組織樣品的重量為 50-100 mg,。
描述：
線粒體是真核細(xì)胞中大部分能量產(chǎn)生的場所，具有雙層膜結(jié)構(gòu)：外膜和折疊的內(nèi)膜,。線粒體的制備關(guān)鍵是確保線粒體的完整性和純度,。
MCE 組織線粒體分離試劑盒采用差速離心法，可快速高效地從組織中分離線粒體,。分離出的線粒體大部分具有完整的內(nèi)外膜,，并具有生理功能。此外,，該試劑盒還可用于提取線粒體蛋白和不含線粒體的胞質(zhì)蛋白,。該試劑盒含有足夠的試劑，可從 50-100 mg 組織中進行 50-100 次分離程序,。
操作說明：從軟組織 (肝臟、腦等) 中分離線粒體1. 稱取約 50-100 mg 新鮮組織,。加入 PBS 洗滌一次,。注：通常要求使用動物處死后不超過一小時并保存在冰上的組織。禁止使用冷凍保存的組織,。2.將組織剪成盡可能小的小塊,加入 10 倍體積預(yù)冷的 Mitochondria Isolation Reagent A (含1 mM PMSF),。注:a.若組織重量為50mg,可大致認(rèn)為組織體積為50μL,即加入500 pLMitochondria Isolation Reagent A。b.PMSF 本試劑盒未提供,需另行購買,。3. 將組織懸液在冰上勻漿 10 次左右,。4. 將組織勻漿 600 g，4oC 離心 5 分鐘,。注：此步離心目的在于去除細(xì)胞核,、細(xì)胞碎片及未裂解細(xì)胞。將離心速度提升至 1,000 g 可獲得更純的線粒體,，但線粒體抽提率相對下降,。5. 將上清轉(zhuǎn)移至干凈的離心管,，11,000 g，4oC 離心 10 分鐘,。注：此步離心目的在于沉淀線粒體,。將離心速度改為 3,500 g 可獲得更純的線粒體，但線粒體抽提率相對下降,。6. 棄去上清,，所得沉淀即為線粒體。注：此步驟也可用于獲得不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白,。收集本步驟中的上清,，12,000 g，4oC 離心 10 分鐘,，獲得的上清液即為不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白,。后續(xù)可用 BCA 法或 Bradford 法測定蛋白濃度從硬組織 (心肌、骨骼肌等) 中分離線粒體1. 稱取約 50-100 mg 新鮮組織,。加入 PBS 洗滌一次,。注：通常要求使用動物處死后不超過一小時并保存在冰上的組織。禁止使用冷凍保存的組織,。2. 將組織剪成盡可能小的小塊,，加入 10 倍體積預(yù)冷的 PBS，冰浴 3 分鐘,，600 g 離心 10-20 秒,，棄去上清，保留組織沉淀,。3. 加入 8 倍體積預(yù)冷的 Trypsin Buffer,，冰浴 20 分鐘，600 g 離心 10-20 秒,，棄去上清,，保留組織沉淀。4. 加入 2 倍體積 Mitochondria Isolation Reagent 重懸組織,，600 g 離心 10-20 秒,，棄去上清，保留組織沉淀,。注：若是心肌組織,，使用 Mitochondria Isolation Reagent A；若是骨骼肌組織,，使用 Mitochondria lsolation Reagent B ,。 其余組織可以優(yōu)先考慮 Mitochondria lsolation Reagent A。5. 加入 8 倍體積預(yù)冷的相應(yīng) Mitochondria Isolation Reagent (含 1 mM PMSF),，在冰上勻漿 20-30 次,。6. 將組織勻漿 600 g,，4oC 離心 5 分鐘。注：此步離心目的在于去除細(xì)胞核,、細(xì)胞碎片及未裂解細(xì)胞,。將離心速度提升至 1,000 g 可獲得更純的線粒體，但線粒體抽提率相對下降,。7. 將上清轉(zhuǎn)移至干凈的離心管,，11,000 g，4oC 離心 10 分鐘,。注：此步離心目的在于沉淀線粒體,。將離心速度改為 3,500 g 可獲得更純的線粒體，但線粒體抽提率相對下降,。8. 棄去上清,，所得沉淀即為線粒體。注：此步驟也可用于獲得不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白,。收集本步驟中的上清,，12,000 g，4oC 離心 10 分鐘,，獲得的上清液即為不含線粒體的細(xì)胞漿蛋白,。后續(xù)可用 BCA 法或 Bradford 法測定蛋白濃度。線粒體的應(yīng)用a. 完整線粒體的功能及酶活研究：每 100 mg 組織分離得到的線粒體中加入 40 μL Mitochondria Storage Buffer,，重懸備用,。后續(xù)可使用 MCE 線粒體膜電位檢測試劑盒 (Cat. No.: HY-K0601) 測定分離得到的線粒體的膜電位。b. 線粒體蛋白分析：每 50-100 mg 組織分離得到的線粒體中加入 150-200 μL 臨用前添加了 PMSF 的 Mitochondria Lysis Buffer (PMSF 終濃度為 1 mM),。裂解后得到的線粒體蛋白經(jīng) 12,000 g,，4oC ，離心 3-5 min 后可用于可用于 PAGE,、WB,、IP 及酶活測定，也可用 BCA 法或 Bradford 法測定蛋白濃度,，預(yù)期獲得的線粒體蛋白濃度約 10-20 mg/mL。
注意事項：1. 若要制備線粒體蛋白樣品,，需在Mitochondria Isolation Reagent 及 Mitochondria Lysis Buffer 中加入 PMSF,，且 PMSF 一定要在試劑加入樣品前1-2 min 內(nèi)加入，防止 PMSF 失效,。2. 整個實驗在冰上或 4oC 進行,。所用溶液需冰浴或 4oC 預(yù)冷。3. 本實驗獲得的線粒體樣品若不能及時使用,，建議 -80oC 保存,。凍存后的線粒體不建議用于膜電位的檢測,。4. PMSF 對人體有害，使用時務(wù)必小心,。5. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,。6. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
銷售產(chǎn)品：DOTA-tri(t-butyl ester) | Tranexamic acid | AMTB (hydrochloride) | 8-Hydroxy-2'-deoxyguanosine | Methylprednisolone succinate (sodium) | CH6953755 | Biotin-HPDP | Pyridoxal phosphate | Herbacetin | SMIP004
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
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