His標(biāo)簽純化凝膠珠
MCE 國際站：Ni-NTA His-Tag Purification Agarose
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：2-8 oC 2 年
簡介：Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 以高度交聯(lián)的 6% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì),，可實(shí)現(xiàn)高產(chǎn)量，高純度的 His 標(biāo)記蛋白的純化,。
概述：MCE Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 是 His 標(biāo)簽蛋白純化介質(zhì),，也稱為鎳柱，可以耐受一定濃度的還原劑,、變性劑或耦合劑等,，能夠簡單、快速,、高特異性地對 His 標(biāo)簽蛋白進(jìn)行純化,。MCE Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 以高度交聯(lián)的 6% 瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，通過化學(xué)方法偶聯(lián)了四配位的氮川三乙酸(NTA),，螯合鎳離子 (Ni2+) 后,，可以形成非常穩(wěn)定的八面體結(jié)構(gòu)，更加穩(wěn)定,、高效,。MCE Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 可以用于純化細(xì)菌、哺乳動物細(xì)胞,、昆蟲及桿狀病毒等表達(dá)的 His 標(biāo)簽重組蛋白,。本品儲存于 20% 乙醇中，每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前,，需將凝膠充分重懸混勻后吸取,。重組蛋白 His 標(biāo)簽上的組氨酸殘基能特異性地結(jié)合到 Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 中的鎳離子上，其他蛋白無法結(jié)合而被洗雜步驟清除,。洗滌后,，His 標(biāo)簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫，從而被分離純化,。
描述：
MCE Ni-NTA His-Tag 純化瓊脂糖由腈三乙酸 (NTA) 螯合劑活化的瓊脂糖珠組成,，隨后通過四個(gè)配位位點(diǎn)帶上二價(jià)鎳 (Ni2+) 離子。
親和層析純化試劑具有低 Ni2+ 泄漏,、高蛋白質(zhì)結(jié)合能力和穩(wěn)定性,，并且與多種化學(xué)品和 pH 值兼容，使其成為大腸桿菌,、酵母,、昆蟲和哺乳動物表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的多組氨酸標(biāo)記蛋白的高性能純化的理想選擇。
操作說明：1. Buffer 的準(zhǔn)備2. 樣品處理：細(xì)菌或酵母表達(dá)的蛋白(1) 挑取單菌落到培養(yǎng)基,，根據(jù)載體使用說明加入相應(yīng)濃度的誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)相應(yīng)的時(shí)間,。(2) 表達(dá)結(jié)束后，收集菌液至離心管中,，7000 rpm,，離心 15 分鐘，棄上清,，收集菌體沉淀,。隨后加入 1/10 體積的 Lysis Buffer 和蛋白酶抑制劑。加入溶菌酶 (工作液濃度為 0.2-0.4 mg/mL,；如果表達(dá)的宿主細(xì)胞內(nèi)含 pLysS 或 pLysE,，可以不加溶菌酶)，需確認(rèn)加入的蛋白酶抑制劑不會影響目的蛋白與 Agarose的結(jié)合,。(3) 將菌體沉淀重懸混勻 (如果菌液濃度高，也可選擇加入 10 μg/mL RNase A 和 5 μg/mL DNase I),，放置在冰上,，然后冰上超聲破碎細(xì)胞，至菌液基本保持澄清,。(4) 將澄清的破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中,，10000 rpm，4℃ 離心 20-30 分鐘,。取上清,，置于冰上備用或 -20℃ 保存。酵母、昆蟲和哺乳動物分泌表達(dá)可溶性蛋白(1) 將細(xì)胞培養(yǎng)液收集至離心管中,，5000 rpm,，離心 10 分鐘，取上清,，棄沉淀,，如上清中不含 EDTA、組氨酸和還原劑等物質(zhì),，可直接加入柱子進(jìn)行后續(xù)操作,；如含有 EDTA、組氨酸和還原劑等物質(zhì),，需用 1×PBS 在 4℃ 條件下經(jīng)透析后才能加入柱子,。(2) 對于大量體積的上清，需加入硫酸銨沉淀濃縮后,，用 1×PBS 在 4℃ 條件下經(jīng)透析后才能加入柱子,。包涵體蛋白 (變性條件)(1) 將培養(yǎng)液收集至離心管中，7000 rpm,，離心 15 分鐘,，棄上清，收集菌體沉淀,。(2) 按照菌體: Lysis Buffer=1:10 (W/V) 的比例將菌體重懸混勻,，冰浴超聲破碎。(3) 將破碎液轉(zhuǎn)移至離心管中,，10000 rpm,，4℃ 離心 20-30 分鐘。棄上清,，重復(fù)步驟 (2) 和步驟 (3) 一次,。(4) 按照菌體: Lysis Buffer (含 8 M 尿素)=1:10 (W/V) 的比例將包涵體懸浮起來。(5) 變性條件下進(jìn)行His標(biāo)簽重組蛋白純化操作,。3. Ni-NTA His-Tag Purification Agarose 的裝填：(1) 用去離子水沖洗柱底篩板,，確保柱底篩板上無氣泡，關(guān)閉柱底出口,，并在柱底部留出 1-2 cm 的去離子水,。(2) 將 Agarose 懸浮混勻，小心地將漿液連續(xù)地倒入柱管中,。用玻璃棒沿著柱壁倒入漿液可減少氣泡的產(chǎn)生,。(3) 打開柱底部出口，最初讓緩沖液緩慢流過層析柱,，然后緩慢增加至最終流速,，這樣可避免液壓對所形成柱床的沖擊,，得到很好的裝填效果。當(dāng)柱床高度穩(wěn)定后,，在最后的裝柱流速下至少再上 3 倍柱體積的去離子水,。標(biāo)記柱床高度。(4) 關(guān)閉柱底部出口,。4. 樣品純化：(1) 平衡：使用至少 5 倍柱體積的 Lysis Buffer 平衡層析柱,。(2) 上樣：利用泵或注射器上樣。為了避免堵塞層析柱,，樣品應(yīng)經(jīng)離心或使用濾膜 (0.22 μm 或 0.45 μm)過濾,。(3) 洗雜：用 Wash Buffer 沖洗柱子，直到紫外吸收達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的基線 (一般至少 10-15 倍柱體積),，收集流出組分和洗雜部分,。注：在平衡緩沖液加入低濃度咪唑可以提高樣品純度。(4) 洗脫：用 Elution Buffer 采用一步法或線性梯度洗脫,。一步洗脫中,，通常 5 倍柱體積洗脫液就足夠了；線性梯度洗脫可以用一個(gè)小的梯度,，例如 20 倍柱體積或更多,，來分離不同結(jié)合強(qiáng)度的蛋白質(zhì)。(5) SDS-PAGE 檢測：將純化得到的樣品 (包括流出組分,、洗雜部分和洗脫部分)以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果,。5. 在位清洗 (Cleaning-in Place, CIP)：(1) 去除強(qiáng)疏水結(jié)合的蛋白，脂蛋白和脂類：使用 5-10 倍柱體積的 30% 異丙醇清洗,，接觸時(shí)間為 15-20 分鐘可以去除此類污染物,，然后再使用 10 倍柱體積的去離子水清洗。也可以選擇使用含有去污劑的酸性或堿性溶液清洗 2 倍柱體積,。去污劑處理后,，需要使用 5 倍柱體積的 70% 乙醇清洗，達(dá)到除去污劑的效果,。最后使用 10 倍柱體積的去離子水清洗,。(2) 去除離子作用結(jié)合的蛋白：使用 1.5 M NaCl 溶液清洗，接觸時(shí)間為 10-15 分鐘,，然后再使用 10 倍柱體積的去離子水清洗,。6. 填料再生：當(dāng) His 標(biāo)簽重組蛋白純化填料使用過程中發(fā)現(xiàn)顏色變淺，或者填料載量明顯變低時(shí),，需要對填料進(jìn)行鎳離子剝離和鎳離子重掛，也就是填料再生,。將填料裝填在合適的層析柱內(nèi),，按照下面操作流程進(jìn)行鎳離子剝離和鎳離子重掛,。(1) 加入 2 倍柱體積的 0.2 M 醋酸溶液 (含 6 M GuHCl ) 清洗一次。(2) 加入 5 倍柱體積的去離子水清洗一次,。(3) 加入 3 倍柱體積的 2% SDS 清洗一次,。(4) 加入 5 倍柱體積的去離子水清洗一次。(5) 加入 5 倍柱體積的無水乙醇清洗一次,。(6) 加入 5 倍柱體積的去離子水清洗一次,。(7) 加入 5 倍柱體積的 100 mM EDTA (pH 8.0) 清洗一次。(8) 加入 5 倍柱體積的去離子水清洗一次,。(9) 加入 5 倍柱體積的 100 mM NiSO4 清洗一次,。(10) 加入 10 倍柱體積的去離子水清洗一次。(11) 填料再生后,，可以立即使用,，也可以保存在 20% 的乙醇中，置于 4℃ 保存,。
注意事項(xiàng)：1. 請勿干燥或冷凍本產(chǎn)品,，以免引起效價(jià)降低，降低純化效率,。2. 本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,。3. 為了您的安全和健康,，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
銷售產(chǎn)品：Mosunetuzumab | DSPE-PEG 2000 | Ribociclib | Canagliflozin | Orlistat | Mitapivat | Abiraterone | Napabucasin | SBI-115 | Sodium 2-oxobutanoate
Trending products：Recombinant Proteins | Bioactive Screening Libraries | Natural Products | Dye Reagents | PROTAC | Isotope-Labeled Compounds
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
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