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一、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體檢測試劑盒
通用名:豬圓環(huán)病毒Ⅱ型IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcinecircovirus (ELISA)
二,、包裝規(guī)格 96T×1/盒,、96T×2/盒、96T*5/盒
三,、預(yù)期用途 用于檢測豬血清中豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(Porcinecircovirus,,PCV2)抗體,。評估豬場豬圓環(huán)苗免疫狀況,,感染豬的血清學(xué)診斷。
四,、試劑盒原理
檢測試劑盒系由預(yù)包被豬圓環(huán)病毒Ⅱ型重組cap蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清,、血漿樣本中豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體,。實(shí)驗(yàn)時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,,在孔中加TMB底物液,,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),;加入終止液終止反應(yīng)后,,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體,。
五、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體檢測試劑盒組成
酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液、濃縮洗滌液,、底物液A,、底物液B,、陽性對照、陰性對照
六,、儲存及有效期
于2~8℃避光保存,,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,,避免受潮,。使用期限為2個月。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,,恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,,設(shè)陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,,2~8℃保存,。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,,蓋好蓋板膜,,置37℃(推薦水浴)避光反應(yīng)30分鐘,。
5.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加350μl工作洗滌液,靜置30秒后棄去,,重復(fù)洗滌5次,,最后一次拍干。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,,同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,,混勻,,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl,,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值,。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,,陰性對照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,陽性對照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.樣品的OD值即ODS,;
2.閾值計(jì)算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC);
SP值≥0.2,,結(jié)果判定為陽性,;SP值<0.2,結(jié)果判定為陰性,。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時表明豬只抗體水平不足,,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測豬血清、血漿中豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體,,根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng),、中、弱的粗略評估,。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時需戴手套,、穿工作衣,嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,,各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性,應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,,如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋,未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶,,使用時需恢復(fù)至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體,,防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8.不同批號試劑組分不得混用,。