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一,、豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒
通用名:豬偽狂犬病毒gE蛋白IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for gE Antibodies to Porcine Pseudorabies virus (ELISA)
二,、包裝規(guī)格 96T×1/盒、96T×2/盒,、96T*5/盒
三,、預(yù)期用途 偽狂犬病是由偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的一種傳染病,,導(dǎo)致懷孕母豬流產(chǎn)死胎,、種豬不育、仔豬發(fā)病死亡等綜合癥候群,。該病免疫預(yù)防用的疫苗為gE基因缺失疫苗(也有聯(lián)用gI,、TK基因缺失),因此檢測gE蛋白的抗體可作為野毒感染的指標(biāo)。
豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒用于檢測豬血清中抗偽狂犬病毒gE蛋白的抗體,,區(qū)別臨床野毒感染豬和用gE基因缺失疫苗免疫的豬,。
四、豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒原理
豬偽狂犬gE抗體檢測試劑盒系由預(yù)包被豬偽狂犬病毒重組gE蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清、血漿樣本中豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,;再加入酶標(biāo)記物,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,,在孔中加TMB底物液,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),;加入終止液終止反應(yīng)后,產(chǎn)物變?yōu)辄S色,;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有豬偽狂犬病毒gE蛋白抗體,。
五、豬偽狂犬gE抗體試劑盒組成
酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液、濃縮洗滌液,、底物液A,、底物液B、陽性對照,、陰性對照
六,、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期為12個(gè)月,。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,,避免受潮。使用期限為2個(gè)月,。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,,恢復(fù)至室溫。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,,設(shè)陰性/陽性對照各2孔,,未用的板條盡快密封,2~8℃保存,。
3.陰,、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl,;樣品孔每孔加入樣品稀釋液90μl,,再加入稀釋后的血清10μl。
注:樣本稀釋比例相當(dāng)于1:100,。
4.混勻,,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘,。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,,靜置30秒后棄去,,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干,。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌,,同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,,混勻,,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl,,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值),。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,,陰性對照≤0.10,陽性對照≥0.6,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.樣品A值≥0.38為陽性,;樣品A值在0.2到0.38之間為可疑,;樣品A值<0.2為陰性,。
2.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性表明該豬可能有野毒感染,或是用非gE基因缺失疫苗免疫的,。
【試驗(yàn)方法的局限性】
本檢測結(jié)果僅供篩查,,不作為確診依據(jù)。