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一,、豬偽狂犬病毒gD抗體檢測(cè)試劑盒
通用名:豬偽狂犬病毒gD抗體試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Test Kit for Antibodies to Porcine Pseudorabies Virus gD (ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒,、96T×2/盒,、96T*5/盒
三,、預(yù)期用途 偽狂犬病又名奧耶斯基氏?。ˋujeszky's disease),,是由偽狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的家畜和多種野生動(dòng)物的一種以發(fā)熱,、奇癢、呼吸和神經(jīng)系統(tǒng)疾病為特征的急性傳染病,。
本試劑用于檢測(cè)豬血清中豬偽狂犬病毒gD抗體,,可用于豬偽狂犬病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià)。
四,、豬偽狂犬病毒gD抗體檢測(cè)試劑盒原理
本試劑盒由預(yù)包被豬偽狂犬病毒重組gD蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清,、血漿樣本中豬偽狂犬病毒gD抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬偽狂犬病毒gD抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,在孔中加TMB底物液,,與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,,產(chǎn)物變?yōu)辄S色,;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬偽狂犬gD抗體,。
五,、豬偽狂犬病毒gD抗體試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液,、濃縮洗滌液,、底物液A、底物液B,、陽(yáng)性對(duì)照,、陰性對(duì)照
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,,有效期為12個(gè)月,。
包被板開(kāi)封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮,。使用期限為2個(gè)月,。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,,設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,未用的板條盡快密封,,2~8℃保存,。
3.陰、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰,、陽(yáng)性對(duì)照100μl,;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加350μl工作洗滌液,,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,,拍干,。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌,同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,混勻,,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,,混勻,,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值,。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,,陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的判定】
1.樣品的OD值即ODS,;
2.閾值計(jì)算:SP值=(ODS-ODNC)/(ODPC-ODNC),;
SP值≥0.2,結(jié)果判定為陽(yáng)性,;SP值<0.2,,結(jié)果判定為陰性。
3.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陰性時(shí)表明豬只抗體水平不足,,建議補(bǔ)打相應(yīng)疫苗,。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)豬血清、血漿中豬偽狂犬病毒gD抗體,,根據(jù)SP值高低可作抗體水平強(qiáng),、中、弱的粗略評(píng)估,。