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一,、口蹄疫O型抗體檢測試劑盒
通用名:口蹄疫病毒O型IgG抗體檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine foot and mouth disease virus (ELISA)
二、包裝規(guī)格 96T×1/盒,、96T×2/盒,、96T*5/盒
三、預(yù)期用途 口蹄疫是由口蹄疫病毒(FMDV)感染引起的偶蹄動物共患的急性,、熱性,、接觸性傳染病。在豬的預(yù)防免疫工作中,,最值得關(guān)注的就是強(qiáng)化免疫的接種時機(jī)問題,。在過高的抗體水平進(jìn)行免疫,過高的抗體水平還會中和疫苗,,影響疫苗的免疫效果,,導(dǎo)致免疫失敗,;在較低的抗體水平進(jìn)行免疫,,又會出現(xiàn)抗體保護(hù)真空期,威脅豬的健康,。
豬口蹄疫O型抗體試劑盒用于檢測豬血清,、血漿中豬口蹄疫病毒O型抗體,可用于豬口蹄疫病毒O型疫苗免疫效果評價,。
四,、口蹄疫O型抗體檢測試劑盒原理
本試劑盒系由預(yù)包被豬口蹄疫病毒O型(OZK/93株+OS/99株)VP1表位多肽抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測豬血清,、血漿樣本中豬口蹄疫病毒O型抗體。實驗時在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本,,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬口蹄疫病毒O型抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,,在孔中加TMB底物液,,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后,,產(chǎn)物變?yōu)辄S色,;用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值,即可知樣品是否含有豬口蹄疫病毒O型抗體,。
五,、口蹄疫O型抗體試劑盒組成
酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液,、濃縮洗滌液、底物液A,、底物液B,、陽性對照、陰性對照
六,、儲存及有效期
于2~8℃避光保存,,有效期為12個月。
包被板開封后請于2~8℃避光保存,,避免受潮,。使用期限為2個月。
七,、適用儀器 含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,37℃恒溫設(shè)備,,可調(diào)微量移液器。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清,,要求血清清亮,,無溶血、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,,長期需置-20℃保存。
2.用工作洗滌液將待檢牛,、羊血清先按32倍稀釋(如5μl血清加入155μl工作洗滌液中,,混勻),待檢豬血清按16倍稀釋(如5μl血清加入75μl洗滌液中,,混勻),,陰、陽性對照不用稀釋,。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液),。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,,設(shè)陰性/陽性對照各2孔,未用的板條盡快密封,,2~8℃保存,。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照50μl,,樣品孔每孔先加入工作洗滌液25μl,再加入稀釋后的樣品25μl,;最后都加入抗原液50μl,。
注:加入抗原后牛、羊樣本稀釋比例相當(dāng)于1:128,,豬樣本稀釋比例相當(dāng)于1:64,。
4.震蕩混勻10秒,蓋好蓋板膜,,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘。
5.甩去孔內(nèi)液體,,每孔加350μl工作洗滌液,,靜置30秒后棄去,重復(fù)洗滌5次,,最后一次拍干,。
6.每孔加抗體工作液50μl,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌,同步驟5,。
8.每孔加酶標(biāo)記物50μl,,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。
9.洗滌,,同步驟5。
10.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,,混勻,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)15分鐘
11.每孔加終止液50μl,,混勻,,于450nm(可用630nm作參比波長)測定各孔吸光值(A值)。
【參考值】 實驗正常的情況下,,陰性對照A值≥0.8,,陽性對照A值≤50%×陰性對照A值。