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一、豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)試劑盒
通用名:豬藍(lán)耳病毒抗體試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (ELISA)
二,、包裝規(guī)格
96T×1/盒,、96T×2/盒,、96T×5/盒
三,、預(yù)期用途
豬藍(lán)耳病是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一種以感染豬發(fā)熱,、厭食,,妊娠母豬晚期流產(chǎn)、產(chǎn)死胎,,各種年齡豬呼吸障礙為特征的高度傳染性疾病,。
豬藍(lán)耳病毒抗體試劑盒用于檢測(cè)豬血清、血漿中豬藍(lán)耳病毒抗體,,可用于豬藍(lán)耳病毒疫苗免疫效果評(píng)價(jià),。
四、豬藍(lán)耳病毒抗體檢測(cè)試劑盒原理
豬藍(lán)耳病毒抗體試劑盒系由預(yù)包被豬藍(lán)耳病毒重組蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,,應(yīng)用酶聯(lián)免疫法(ELISA)原理檢測(cè)豬血清,、血漿樣本中豬藍(lán)耳病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和待檢樣本,,經(jīng)溫育后若樣品中含有豬藍(lán)耳病毒抗體,,則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后,;再加入酶標(biāo)記物,,與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物,,在孔中加TMB底物液,,與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),;加入終止液終止反應(yīng)后,,產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,,即可知樣品是否含有豬藍(lán)耳病毒抗體,。
五、豬藍(lán)耳病毒抗體試劑盒組成
酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物,、樣品稀釋液、濃縮洗滌液,、底物液A、底物液B,、陽(yáng)性對(duì)照,、陰性對(duì)照
六、儲(chǔ)存及有效期
于2~8℃避光保存,,有效期為12個(gè)月,。
包被板開封后請(qǐng)于2~8℃避光保存,避免受潮,。使用期限為2個(gè)月,。
七、適用儀器 含450nm,、630nm波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀,,37℃恒溫設(shè)備,可調(diào)微量移液器,。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,,要求血清清亮,無(wú)溶血、無(wú)污染,。樣品1周內(nèi)可于2~8℃保存,,長(zhǎng)期需置-20℃保存。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋(如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中,,混勻),。陰、陽(yáng)性對(duì)照不用稀釋,。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,,然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,,恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條,設(shè)陰性/陽(yáng)性對(duì)照各2孔,,未用的板條盡快密封,,2~8℃保存。
3.陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔分別加入陰,、陽(yáng)性對(duì)照100μl;樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。
4.混勻,,蓋好蓋板膜,置37℃(推薦水?。┍芄夥磻?yīng)30分鐘,。
5.甩去孔內(nèi)液體,每孔加350μl工作洗滌液,,靜置30秒后棄去,,重復(fù)洗滌5次,最后一次拍干,。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl,,蓋好蓋板膜,置37℃避光反應(yīng)30分鐘,。
7.洗滌,,同步驟5。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,,混勻,蓋好蓋板膜,,置37℃避光反應(yīng)10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl,混勻,于450nm(可用630nm作參比波長(zhǎng))測(cè)定各孔吸光值,。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,,陰性對(duì)照的平均OD值即ODNC應(yīng)≤0.3,陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值即ODPC應(yīng)≥0.6,。