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孔雀石綠,分子式為C23H25ClN2,,是人工合成的有機(jī)化合物,是一種有毒的三苯甲烷類化學(xué)物,,既是染料,,也是殺真菌、殺細(xì)菌,、殺寄生蟲(chóng)的藥物,,長(zhǎng)期超量使用可致癌,無(wú)公害水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域國(guó)家明令禁止添加,。 2019年12月27日,,孔雀石綠被列入食品動(dòng)物中禁止使用的藥品及其他化合物清單。
孔雀石綠進(jìn)入水生動(dòng)物體內(nèi)后,,會(huì)快速代謝成脂溶性的無(wú)色孔雀石綠,。孔雀石綠具有潛在的致癌,、致畸,、致突變的作用,其在養(yǎng)殖業(yè)中的使用未得到美國(guó)食品與藥物管理局(FDA )的認(rèn)可,;根據(jù)歐盟法案2002/675/EC的規(guī)定,,動(dòng)物源性食品中孔雀石綠和無(wú)色孔雀石綠殘留總量限制為2μg/kg;日本的肯定列表也明確規(guī)定在進(jìn)口水產(chǎn)品中不得檢出孔雀石綠殘留,;我國(guó)在農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《NY5071- 2002無(wú)公害食品魚(yú)藥使用準(zhǔn)則》中也將孔雀石綠列為禁用藥物,。由于沒(méi)有低廉有效的替代品,孔雀石綠在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用屢禁不止,。
深圳艾瑞斯生產(chǎn)的孔雀石綠膠體金快速檢測(cè)卡應(yīng)用競(jìng)爭(zhēng)抑制膠體金免疫層析的原理制成,,用于檢測(cè)水產(chǎn)品組織樣本中孔雀石綠殘留。樣本溶液滴入檢測(cè)卡的加樣孔后,,樣本溶液中的孔雀石綠與金標(biāo)抗體相結(jié)合,,從而阻止金標(biāo)抗體與纖維素膜上孔雀石綠偶聯(lián)物結(jié)合。當(dāng)樣本溶液中的孔雀石綠含量大于檢測(cè)限時(shí),,檢測(cè)線T不顯色或顯色明顯比C線淺,,結(jié)果為陽(yáng)性;當(dāng)樣本溶液中孔雀石綠含量小于檢測(cè)限時(shí)檢測(cè)線T顯紫紅色(T線與C線一致或更深),,結(jié)果為陰性,。
樣本前處理:
1、取切碎的一定量的去脂肪水產(chǎn)品組織樣品,,用均質(zhì)機(jī)均質(zhì),;
2,、取約4 g 均質(zhì)物于50 mL 離心管中;
3,、依次加入0.5 mL提取劑1和1 mL提取劑2,,再加入4 mL乙腈,擰緊管蓋劇烈振蕩混勻2分鐘,;
4,、室溫下(20-25℃) 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5 分鐘;
5,、吸取1 mL 上清液于10 mL離心管中,,加入100 μl氧化劑,60℃下氮?dú)饣蚩諝獯蹈?,得固體殘?jiān)?/span>
6,、向吹干的離心管中加入0.3 mL MG復(fù)溶液,用吸管反復(fù)吸打管內(nèi)液體以沖洗及溶解管壁上的待測(cè)物質(zhì),,作為待檢樣品溶液,。
樣品檢測(cè):
1、撕開(kāi)鋁箔袋,,取出檢測(cè)卡,,水平放置桌面上;
2,、用滴管吸取待檢樣品溶液,,垂直滴加4滴(約120 μL)到金標(biāo)微孔中,再用滴管將微孔中的紅色物質(zhì)和待檢溶液充分混勻,,靜置2 min,,吸取全部液體滴加到檢測(cè)卡的加樣孔中(S處);
3,、加樣后開(kāi)始計(jì)時(shí),,室溫下放置8-10分鐘判斷結(jié)果,超過(guò)10分鐘的結(jié)果只能作為參考,。
結(jié)果判斷:
陰性:對(duì)照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,,檢測(cè)線(T)顯色比C線深或者一樣深,說(shuō)明樣品中待檢物質(zhì)濃度低于檢測(cè)限或無(wú)待檢物殘留,。
陽(yáng)性:對(duì)照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,,檢測(cè)線(T)不顯色或T線顯色明顯比C線淺,說(shuō)明樣品中待測(cè)物濃度高于檢測(cè)限,。T線明顯顯示為綠色的,,可判為陽(yáng)性。
失效:在檢測(cè)窗內(nèi),對(duì)照線(C)不出現(xiàn)紫紅色線,。
注意事項(xiàng):
1 ,、過(guò)期或鋁箔袋破損的產(chǎn)品,均不可使用,。
2 ,、檢測(cè)卡從冰箱中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)到室溫后打開(kāi),打開(kāi)的檢測(cè)卡應(yīng)盡快使用以免受潮后失效,。
3 ,、不要觸摸檢測(cè)卡中央的白色膜面。
4 ,、取液滴管不可混用,以免交叉污染,。
5 ,、待檢樣品溶液需清亮、無(wú)混濁顆粒,、無(wú)細(xì)菌污染,,否則容易導(dǎo)致阻塞、顯色不明顯等異?,F(xiàn)象,,從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判定。