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深圳市艾瑞斯儀器有限公司
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原理及用途
深圳艾瑞斯生產(chǎn)玉米赤霉烯酮酶聯(lián)免疫檢測試劑盒的采用間接競爭ELISA方法檢測谷物,、飼料,、食用油,、啤酒、醬油等樣本中的玉米赤霉烯酮（Zearalenone,，ZEN）（又稱F-2 毒素）,，試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物,、抗體,、標準品及其他配套試劑組成。檢測時,，加入標準品或樣本溶液,，樣本中的玉米赤霉烯酮和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗玉米赤霉烯酮抗體，加入酶標記物后,，用TMB底物顯色,，樣本吸光度值與其所含玉米赤霉烯酮含量成負相關(guān)，與標準曲線比較即可得出樣本中玉米赤霉烯酮的殘留量,。
樣本處理前須知：
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,，以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液：
配液1：樣本提取液
90%甲醇,，即V甲醇:V去離子水=9：1,。
配液2：工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水)。
樣本前處理步驟：
谷物（大米,、玉米,、小米等低脂含量）及其食品原料
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中，加8ml樣本提取液,，振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；
2）取0.5ml上清，加入2ml去離子水,，混勻,；
3）取50μl進行分析,。
稀釋倍數(shù)：20 檢測下限：6ppb
飼料及飼料原料
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,，加8ml樣本提取液，振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；
2）取0.5ml上清，加入1ml提取液,，震蕩混勻,；
3）取0.5ml混勻液體，加入2ml去離子水,，混勻,；
4）取50μl進行分析。
稀釋倍數(shù)：60 檢測下限：18ppb
玉米皮,、麥麩等吸水性強的樣本
1）稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,，加24ml樣本提取液，振蕩5分鐘,，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘,；
2）取0.5ml上清，加入2ml去離子水,，混勻,；
3）取50μl進行分析。
樣本稀釋倍數(shù)：60 檢測下限：18ppb
注：由于毒素在樣本中的分布呈非均勻狀態(tài),，取樣時需多點取樣充分混勻后再取2g進行試驗,。
酶聯(lián)免疫試驗步驟
將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結(jié)晶需恢復到室溫以充分溶解,，每種液體試劑使用前均須搖勻,。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋,，保存于2-8℃,。
1 編 號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行,，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置,。
2 加樣反應(yīng)：加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物50µl/孔,，再加入50µl/孔的抗體工作液,，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘,。
3 洗 滌：小心揭開蓋板膜,，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復洗滌5次，最后一次拍干（用吸水紙拍干,，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）,。
4 顯 色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl,，輕輕振蕩5秒混勻,，25℃避光顯色15分鐘（若藍色過淺，可適當延長反應(yīng)時間）,。
5 終 止：每孔加入終止液50µl,，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng),。
6 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）,。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
結(jié)果分析
1 百分吸光率的計算
標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準液（0ppb）的吸光度值,，再乘以100%,，即
百分吸光度值（%）＝A×100%
A0
A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標準溶液的平均吸光度值
2 標準曲線的繪制與計算
以標準液百分吸光率為縱坐標，對應(yīng)的標準液濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標,，繪制標準液的半對數(shù)曲線圖,。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實際濃度,。
