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NCI-H446人小細胞肺癌細胞.
產品基本信息
細胞名稱：NCI-H446人小細胞肺癌細胞.
種屬來源：人
組織來源：肺
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
生長特性：半貼壁生長
培養(yǎng)基:：RPMI-1640+10% FBS+1%PS
生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃
傳代方法：1:2至1:3，每周2- 3次
凍存條件：無血清細胞凍存液,，液氮儲存
支原體檢測：無
細胞培養(yǎng)操作
1) 復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。
a,、收集細胞培養(yǎng)上清：抽出瓶中的培養(yǎng)基和懸浮的細胞1000rpm離心5分鐘,，棄去上清，細胞重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基),。
b,、剩下貼壁的細胞，用不含鈣,、鎂離子的PBS輕輕潤洗細胞1次,。
c、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細胞,，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3 min(視細胞情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，加少量培養(yǎng)基終止消化,。
d,、按3mL/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻吹下細胞后裝入無菌離心管中,，1000 rpm離心5 min,，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,。
e,、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)中,。(第一次傳代建議一個滿的T25傳一個10cm或者2個T25),。
3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例;
a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心5 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，加 1 mL血清重懸細胞,，進行細胞計數。
b,、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細胞懸液,，注意凍存管做好標識。
c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
培養(yǎng)注意事項
1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系,。
2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,，責任由客戶自行承擔。
3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h,。
4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min,，棄上清,。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min,，,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),。
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。
6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因,，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。
7. 該細胞僅供科研使用。
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。
9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿,。
懸浮細胞收貨注意事項：
1、收貨時需鏡下拍照(看密度,、狀態(tài))
2,、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)
a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng)
b.如密度50%-80%,，建議換液培養(yǎng),，隔天觀察密度
c.如密度90%，建議傳代
3,、換液及傳代處理前,，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(使細胞沉到瓶底);收集上清，必須將瓶內所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集!離心轉速為1000rpm,，5min,。
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