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NK92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷

產(chǎn)品基本信息：

細(xì)胞名稱：NK92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：淋巴

細(xì)胞形態(tài)：淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

培養(yǎng)基: NK92專用*培養(yǎng)基(已添加IL2)

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3,，每周 3次

凍存條件：10%DMSO+50?S+40%*培養(yǎng)基,，液氮儲(chǔ)存

支原體檢測(cè)：無(wú)

注：該細(xì)胞復(fù)蘇后需一周左右時(shí)間方可恢復(fù)狀態(tài)，凍存時(shí)密度盡量大些,。

細(xì)胞培養(yǎng)操作：

復(fù)蘇：37℃水浴融化后,，750 rpm離心5 min，棄凍存液,，加入培養(yǎng)基重懸,，在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，起始密度為每毫升2-3×105個(gè)細(xì)胞

傳代：搖晃培養(yǎng)瓶,，使細(xì)胞粗略混勻,，取細(xì)胞計(jì)數(shù)，按每毫升2-3×105個(gè)活細(xì)胞的細(xì)胞密度進(jìn)行全換液或半換液,。每48 h傳一次,。

凍存：凍存液：10%DMSO+50?S+40%*培養(yǎng)基，細(xì)胞計(jì)數(shù)后,，取1×106~1×107個(gè)細(xì)胞,，800 rpm離心5 min，棄原培養(yǎng)基,，加入1 mL凍存液,，輕輕混勻，標(biāo)注封口后,，放入凍存盒,，置于-80℃ 24 h，隔天再置于液氮?dú)庀蟆?/p>

注意事項(xiàng)：

1. IL-2分裝使用,，避免反復(fù)凍融;

2. 先配置基礎(chǔ)培養(yǎng)基,，用的時(shí)候再將IL-2加入培養(yǎng)基中;

3. 傳細(xì)胞時(shí),，細(xì)胞不能在培養(yǎng)箱外放太久,，小于1 h;

4. 重懸NK-92細(xì)胞要輕柔,，不要太劇烈;

5. 不要加抗菌素，若一定要加,，就加1%的青;

6. 全換液比半換液好些,，每48 h傳代一次;

7. 培養(yǎng)該細(xì)胞一定要IL-2 500-1000 U/ml，IL-2濃度無(wú)需再增高,，過高會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng),，也不能再降低，過低細(xì)胞會(huì)死亡;

8. 培養(yǎng)過程中有少量細(xì)胞分泌物屬于正?，F(xiàn)象,，不影響細(xì)胞生長(zhǎng)。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象，干冰運(yùn)輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否*揮發(fā),，細(xì)胞是否解凍,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h,。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞,，900 rpm-1000 rpm離心3 min,，棄上清,。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min,，,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài),，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,。 收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9. 注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿,。