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THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（STR鑒定正確）

產(chǎn)品基本信息

細(xì)胞名稱：THP-1人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（STR鑒定正確）

種屬來(lái)源：人

組織來(lái)源：外周血

細(xì)胞形態(tài)：?jiǎn)魏思?xì)胞

生長(zhǎng)特性：懸浮生長(zhǎng)

培養(yǎng)基:：90% 1640+10% FBS+PS+ 0.05 mM 2-巰基乙chun(2-mercaptoethanol)

生長(zhǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3,，每周 2-3次

凍存條件：無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

支原體檢測(cè)：無(wú)

細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1 mL 10%FBS 1640培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入6 cm皿中,，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。

方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心3-5min分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含10ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

備注：次傳代時(shí),，若培養(yǎng)基中有細(xì)胞碎片，則將細(xì)胞懸液裝入無(wú)菌離心管中,，1000 rpm離心4 min,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻,，按1:1分到新的裝有10mL新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng),。

3)細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面10cm皿為例;

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液,，裝入無(wú)菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液，加 1 mL新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b,、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻,，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

c,、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系,。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如細(xì)胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子等,，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題,，責(zé)任由客戶自行承擔(dān),。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象,。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化,，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min,，棄上清,。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min,，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng),。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片,，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流,。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況,，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決,。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用,。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,。收到細(xì)胞后第一次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿,。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

懸浮細(xì)胞收貨注意事項(xiàng)：

1,、收貨時(shí)需鏡下拍照(看密度、狀態(tài))

2,、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)

a.如密度50%以下，建議換液并豎瓶培養(yǎng)

b.如密度50%-80%,，建議換液培養(yǎng),，隔天觀察密度

c.如密度90%,，建議傳代

3、換液及傳代處理前,，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(shí)(使細(xì)胞沉到瓶底);收集上清，必須將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤(rùn)洗瓶底并收集!離心轉(zhuǎn)速為1000rpm,，5min。