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CD8+T人淋巴細胞

產品基本信息

細胞名稱：CD8+T人淋巴細胞

種屬來源：人

組織來源： 外周血

生長特性：懸浮生長

形態(tài)特征：球形細胞樣

培養(yǎng)基: 專用培養(yǎng)基

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:4,，每周 3次

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

支原體檢測：無

細胞培養(yǎng)操作

1)復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后輕輕吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基,，培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度。

2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心3-5min分鐘,，棄去上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

方法二：可選擇半數換液方式,，棄去半數培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例;

a,、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min,，棄去上清液,，用PBS清洗一遍，棄盡PBS,，然后進行細胞計數,。

b、根據細胞數量對應加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液,，注意凍存管做好標識,。

c、將凍存管放入-80℃冰箱,，24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系,。

2. 仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài),、所用培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子等,，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題,，責任由客戶自行承擔,。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正常現象,。觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化,，懸浮細胞直接混勻收集細胞,，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清,。加5 mL PBS重懸細胞,，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，,，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài),，便于和我司技術部溝通交流,。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯系,，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7. 該細胞僅供科研使用,。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 ,。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿,。

懸浮細胞收貨注意事項：

1,、收貨時需鏡下拍照(看密度、狀態(tài))

2,、靜置后需鏡下拍照(看整體密度)

a.如密度50%以下,，建議換液并豎瓶培養(yǎng)

b.如密度50%-80%，建議換液培養(yǎng),，隔天觀察密度

c.如密度90%,，建議傳代

3、換液及傳代處理前，培養(yǎng)瓶豎著放置至少半小時(使細胞沉到瓶底);收集上清,，必須將瓶內所有培養(yǎng)基(70ml)全部收集!并用PBS(10ml)潤洗瓶底并收集!離心轉速為1000rpm,，5min。