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人乳腺癌腫瘤細胞

產(chǎn)品基本信息

細胞名稱：人乳腺癌腫瘤細胞

組織來源：乳腺

細胞形態(tài)：不規(guī)則細胞

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基:：專用培養(yǎng)基

生長條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳;溫度：37℃

傳代方法：1:2至1:3,，每周 3次

凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存

支原體檢測：無

細胞培養(yǎng)操作

1)復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液,，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中，加入約4 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜),。第二天換液并檢查細胞密度,。

2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

a,、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml*培養(yǎng)基終止消化,。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min,，棄去上清液,，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c,、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

3)細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面 T25 瓶為例;

a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,，裝入無菌離心管中,，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液,，用PBS清洗一遍,，棄盡PBS，加 1 mL血清重懸細胞,，進行細胞計數(shù),。

b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,，使細胞密度5×106~1×107/mL,，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識,。

c,、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

培養(yǎng)注意事項

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致,，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,，是正?，F(xiàn)象。.觀察好細胞狀態(tài)后,，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置2-4h,。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞,，900 rpm-1000 rpm離心3 min,，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞,，再900 rpm-1000 rpm離心3 min,，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞,，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng),。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片,，記錄細胞狀態(tài),，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況,，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決,。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞,。 收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9. 注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿,。不是1個T25瓶傳2個10cm皿,。