人脂肪炎癥因子(Apelin)elisa試劑盒

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規(guī)格：96T/48T

包裝：盒

檢測原理：采用雙抗夾心法

保質期：六個月

產(chǎn)品保存條件：2-8°C

應用范圍：僅供科研研究實驗使用

樣品形式：血清/血漿/組織勻漿/細胞培養(yǎng)上清/其它生物液體（具體情況請咨詢）

標本的采集及保存

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。

2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心。

3.尿液：用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實行,。

4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/ 分）,。仔細收集上清,。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液,，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復凍融，以使細胞破壞并 放出細胞內成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心,。

5.組織標本：切割標本后,，稱取重量。加入一定量的PBS,，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）,。仔細收集上清,。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用,。

標本要求：

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒組成：

48孔配制：

1.說明書:1份

2.封板膜:2片（48）

3.密封袋:1個

4.酶標包被板:1×48 (2-8℃保存)

5.標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.酶標試劑:3ml×1瓶(2-8℃保存)

8.樣品稀釋液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

9.顯色劑A液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

10.顯色劑B液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

11.終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12.濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

96孔配置：

1.說明書:1份

2.封板膜:2片（96）

3.密封袋: 1個

4.酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.酶標試劑:3ml×1瓶(2-8℃保存)

8.樣品稀釋液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

9.顯色劑A液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

10.顯色劑B液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

11.終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12.濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

人脂肪炎癥因子(Apelin)elisa試劑盒

需要自備的試劑和器材

1.37℃恒溫箱,。

2.標準規(guī)格酶標儀,。

3.精密移液器及一次性吸頭

4.蒸餾水，

5.一次性試管

6.吸水紙

操作步驟

1,、標準品的稀釋：在酶標包被板上設標準品孔10孔,，在第一、第二孔中分別加標準品100μl,，然后在第一,、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻,；然后從第一孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,，混勻,；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為9mmol/L,，6 mmol/L，3 mmol/L,，1.5mmol/L,， 0.75 mmol/L）。

2,、加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5,、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復5次,，拍干,。

6、加酶：每孔加入酶標試劑50μl,，空白孔除外,。

7、溫育：操作同3,。

8,、洗滌：操作同5。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10,、終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11,、測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標板朝下用力拍幾次,；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次,。

自動洗板：如果有自動洗板機,，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

注意事項：

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。

請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。

底物請避光保存,。

嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

本試劑不同批號組分不得混用,。

如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD      

值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值      

代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。  

檢測范圍、 OD值：

具體請咨詢在線客服,，或者來電索要詳細說明書,！

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