大鼠β-神經(jīng)生長因子(β-NGF)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認為ELISA法具有靈敏、特異,、簡單,、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,，也適合于血清流行病學調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗ti,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,，

組成結(jié)構(gòu)

1,、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2,、2,、血漿：EDTA、檸檬suan鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液。

5,、保存：如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

大鼠β-神經(jīng)生長因子(β-NGF)elisa試劑盒

操作步驟：

1,、使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。

2、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復孔的盡量做復孔,。

3,、加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul標記的抗體,。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育45分鐘,。

4、甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干,。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

5、每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘。

6,、甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復此操作4次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。

7,、每孔加入底物A、B各50ul,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育5分鐘。避免光照。

8,、取出酶標板,，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。

9,、在450nm波長處測定各孔的OD值。

操作注意事項：

1,、試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,，不可保存

2,、實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。

3、不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。

4,、使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5、使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6、底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

7,、加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。

一般來講，96T能檢測90個樣本,，48T能檢測42個樣本,，這里面需要用標樣來做標準曲線，所以各位需要做實驗的老師們,，請在購買ELISA試劑盒的時候注意,，需要做多少個樣本，在決定買多大規(guī)格的試劑盒,，以免做實驗時出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費,！

原理：將特異性抗體包被于固相載體表面，經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,，另一組只加酶標記抗原,，經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差,，即為所要測定的未知抗原的量,。

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