人生長停滯特異性蛋白6(Gas6)elisa試劑盒

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規(guī)格：96T/48T

包裝：盒

檢測原理：采用雙抗夾心法

保質(zhì)期：六個月

產(chǎn)品保存條件：2-8°C

應(yīng)用范圍：僅供科研研究實驗使用

樣品形式：血清/血漿/組織勻漿/細(xì)胞培養(yǎng)上清/其它生物液體（具體情況請咨詢）

標(biāo)本的采集及保存

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

2.血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

3.尿液：用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照此實行,。

4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/ 分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并 放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

5.組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。

標(biāo)本要求：

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

試劑盒組成：

48孔配制：

1.說明書:1份

2.封板膜:2片（48）

3.密封袋:1個

4.酶標(biāo)包被板:1×48 (2-8℃保存)

5.標(biāo)準(zhǔn)品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.酶標(biāo)試劑:3ml×1瓶(2-8℃保存)

8.樣品稀釋液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

9.顯色劑A液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

10.顯色劑B液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

11.終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12.濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

96孔配置：

1.說明書:1份

2.封板膜:2片（96）

3.密封袋: 1個

4.酶標(biāo)包被板:1×96 (2-8℃保存)

5.標(biāo)準(zhǔn)品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)

6.標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)

7.酶標(biāo)試劑:3ml×1瓶(2-8℃保存)

8.樣品稀釋液:3ml×1瓶(2-8℃保存)

9.顯色劑A液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

10.顯色劑B液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

11.終止液：3ml×1瓶(2-8℃保存)

12.濃縮洗滌液：（20ml×20倍）×1瓶(2-8℃保存)

人生長停滯特異性蛋白6(Gas6)elisa試劑盒

需要自備的試劑和器材

1.37℃恒溫箱,。

2.標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀,。

3.精密移液器及一次性吸頭

4.蒸餾水，

5.一次性試管

6.吸水紙

操作步驟

1,、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔,，在第一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl,，然后在第一,、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻,；然后從第一孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三,、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,，再各取50μl分別加到第五,、第六孔中，再在第五,、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,，混勻；混勻后從第五,、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中，再在第七,、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl,，濃度分別為9mmol/L,，6 mmol/L，3 mmol/L,，1.5mmol/L,， 0.75 mmol/L）。

2,、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。

4、配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用,。

5,、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。

6,、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7,、溫育：操作同3,。

8、洗滌：操作同5。

9,、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

10,、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11,、測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次,。

自動洗板：如果有自動洗板機,，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

注意事項：

試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

底物請避光保存,。

嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

本試劑不同批號組分不得混用,。

如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn),。

計算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，    

在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD      

值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋      

倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)      

準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值      

代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數(shù),，即為樣品的實際濃度,。  

檢測范圍、 OD值：

具體請咨詢在線客服,，或者來電索要詳細(xì)說明書,！