小鼠脂蛋白相關磷脂酶(LpPLA2)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結果，認為ELISA法具有靈敏,、特異,、簡單、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,。不僅適用于臨床標本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,，也適合于血清流行病學調查,。本法不僅可以用來測定抗ti，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大，

組成結構

1,、血清：操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離,。

2、2,、血漿：EDTA,、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4,、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液,。

5、保存：如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70℃保存,，避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

操作步驟：

1,、使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。

2,、根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復孔的盡量做復孔。

3,、加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔,、加入待測樣品50ul于反應孔內(nèi)。立即加入50ul標記的抗體,。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘,。

4,、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作4次,。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。

5,、每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育30分鐘,。

小鼠脂蛋白相關磷脂酶(LpPLA2)elisa試劑盒

6、甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次,。

7、每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘,。避免光照,。

8、取出酶標板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應立即測定結果。

9,、在450nm波長處測定各孔的OD值,。

操作注意事項：

1、試劑應按標簽說明書儲存,，使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應丟棄，不可保存

2,、實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質,。

3,、不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質前使用,。

4、使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5,、使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6,、底物A應揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應立即讀取OD值,。

7、加入試劑的順序應一致,，以保證所有反應板孔溫育的時間一樣,。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。

實驗詳細操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣ben稀釋ye40μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

一般來講,，96T能檢測90個樣本，48T能檢測42個樣本,，這里面需要用標樣來做標準曲線,，所以各位需要做實驗的老師們，請在購買ELISA試劑盒的時候注意,，需要做多少個樣本,，在決定買多大規(guī)格的試劑盒，以免做實驗時出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費,！

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