人蛋白激酶R(PKR)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認(rèn)為ELISA法具有靈敏,、特異、簡(jiǎn)單,、快速,、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗ti,，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,，

組成結(jié)構(gòu)

1,、血清：操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2,、2,、血漿：EDTA、檸檬suan鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液。

5,、保存：如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血,。如果血清中大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人蛋白激酶R(PKR)elisa試劑盒

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后,，為保證檢測(cè)效果,，需要根據(jù)說(shuō)明書(shū)中保存條件正確儲(chǔ)存。除非特別注明,，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲(chǔ)存

2. 在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,，請(qǐng)確認(rèn)包裝中的試劑盒成分與說(shuō)明書(shū)一致，再進(jìn)行后續(xù)操作

3. 溶解標(biāo)準(zhǔn)品過(guò)程中,，注意標(biāo)準(zhǔn)品是否受潮,，過(guò)程中要避免產(chǎn)生泡沫

4. 為了避免交叉污染，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,、上樣,、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請(qǐng)分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時(shí),，正確使用封板膠紙可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性

6. 正確洗板有助于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板前應(yīng)為無(wú)色,，請(qǐng)避光保存。加入孔板后,，將由無(wú)色變成不同程度的藍(lán)色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致,，加入終止液,，溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果出現(xiàn)綠色,，即表明終止液與底物未混勻,，請(qǐng)充分混合

實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔加待測(cè)樣本50μL,。

3.  樣本孔先加待測(cè)樣本10μL,，再加樣ben稀釋ye40μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

一般來(lái)講,，96T能檢測(cè)90個(gè)樣本,，48T能檢測(cè)42個(gè)樣本，這里面需要用標(biāo)樣來(lái)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，所以各位需要做實(shí)驗(yàn)的老師們,，請(qǐng)?jiān)谫?gòu)買(mǎi)ELISA試劑盒的時(shí)候注意，需要做多少個(gè)樣本,，在決定買(mǎi)多大規(guī)格的試劑盒,，以免做實(shí)驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費(fèi)！

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