人循環(huán)腫瘤細胞(CTC)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據已經使用的結果，認為ELISA法具有靈敏,、特異、簡單,、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗ti,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,，

組成結構

1,、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內du素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離,。

2、2,、血漿：EDTA,、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4,、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液,。

5、保存：如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

人循環(huán)腫瘤細胞(CTC)elisa試劑盒

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后，為保證檢測效果,，需要根據說明書中保存條件正確儲存,。除非特別注明，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲存

2. 在實驗進行前,，請確認包裝中的試劑盒成分與說明書一致,，再進行后續(xù)操作

3. 溶解標準品過程中，注意標準品是否受潮,，過程中要避免產生泡沫

4. 為了避免交叉污染,，配置不同濃度標準品、上樣,、加不同試劑都需要換槍頭,。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時，正確使用封板膠紙可保證結果的準確性

6. 正確洗板有助于實驗結果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板前應為無色,，請避光保存,。加入孔板后，將由無色變成不同程度的藍色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致，加入終止液,，溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色,。如果出現綠色，即表明終止液與底物未混勻,，請充分混合

實驗詳細操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣ben稀釋ye40μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

常見問題解析：

1、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,，但是在檢測之前還應該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍。

2,、加樣中可能遇到的問題,。

3、洗板時容易造成誤差,。

4,、顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長，都有可能造成顯色劑不顯色。

5,、終止反應：在加終止劑的時候由于傾倒速度快,，產生氣泡，造成假陽性結果,，所以在倒終止劑的時候要緩慢倒,。

6、讀板：讀板的時候首先應該保證板的清潔干凈,。

一般來講,，96T能檢測90個樣本，48T能檢測42個樣本,，這里面需要用標樣來做標準曲線,，所以各位需要做實驗的老師們，請在購買ELISA試劑盒的時候注意,，需要做多少個樣本,，在決定買多大規(guī)格的試劑盒，以免做實驗時出現試劑盒不夠用或者浪費,！

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