小鼠血清淀粉樣P物質(zhì)1(SAP-1)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認為ELISA法具有靈敏、特異,、簡單,、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查,。本法不僅可以用來測定抗ti,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,，

組成結(jié)構(gòu)

1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管,。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2,、2,、血漿：EDTA、檸檬suan鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3,、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,，取上清液。

5,、保存：如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血,。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

小鼠血清淀粉樣P物質(zhì)1(SAP-1)elisa試劑盒

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后,，為保證檢測效果,，需要根據(jù)說明書中保存條件正確儲存。除非特別注明,，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲存

2. 在實驗進行前,，請確認包裝中的試劑盒成分與說明書一致，再進行后續(xù)操作

3. 溶解標準品過程中,，注意標準品是否受潮,，過程中要避免產(chǎn)生泡沫

4. 為了避免交叉污染，配置不同濃度標準品,、上樣,、加不同試劑都需要換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時,，正確使用封板膠紙可保證結(jié)果的準確性

6. 正確洗板有助于實驗結(jié)果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板前應(yīng)為無色,，請避光保存。加入孔板后,，將由無色變成不同程度的藍色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致,，加入終止液,，溶液顏色由藍色變?yōu)辄S色。如果出現(xiàn)綠色,，即表明終止液與底物未混勻,，請充分混合

實驗詳細操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；樣本孔加待測樣本50μL,。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL,；空白孔不加,。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

一般來講,，96T能檢測90個樣本，48T能檢測42個樣本,，這里面需要用標樣來做標準曲線,，所以各位需要做實驗的老師們，請在購買ELISA試劑盒的時候注意,，需要做多少個樣本,，在決定買多大規(guī)格的試劑盒，以免做實驗時出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費,！

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