小鼠N-乙酰葡萄糖胺轉(zhuǎn)移酶-I(GnTI)試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果，認(rèn)為ELISA法具有靈敏,、特異,、簡單、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點(diǎn),。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查,。本法不僅可以用來測定抗ti，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大，

組成結(jié)構(gòu)

1,、血清：操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)du素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2、2,、血漿：EDTA,、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3,、細(xì)胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4,、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液,。

5,、保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

小鼠N-乙酰葡萄糖胺轉(zhuǎn)移酶-I(GnTI)試劑盒

試劑盒小貼士

1. 在收到試劑盒后，為保證檢測效果,，需要根據(jù)說明書中保存條件正確儲存,。除非特別注明，試劑盒大多是在2～8°C條件下儲存

2. 在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前,，請確認(rèn)包裝中的試劑盒成分與說明書一致,，再進(jìn)行后續(xù)操作

3. 溶解標(biāo)準(zhǔn)品過程中，注意標(biāo)準(zhǔn)品是否受潮,，過程中要避免產(chǎn)生泡沫

4. 為了避免交叉污染,，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品、上樣,、加不同試劑都需要換槍頭,。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽

5. 每次孵育時(shí)，正確使用封板膠紙可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性

6. 正確洗板有助于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性

7. TMB顯色底物在上板前應(yīng)為無色,，請避光保存,。加入孔板后，將由無色變成不同程度的藍(lán)色

8. 終止液上板順序需與底物上板順序一致,，加入終止液,，溶液顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果出現(xiàn)綠色,，即表明終止液與底物未混勻,，請充分混合

實(shí)驗(yàn)詳細(xì)操作程序

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；樣本孔加待測樣本50μL。

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加樣ben稀釋ye40μL,；空白孔不加。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

一般來講，96T能檢測90個樣本,，48T能檢測42個樣本,，這里面需要用標(biāo)樣來做標(biāo)準(zhǔn)曲線，所以各位需要做實(shí)驗(yàn)的老師們,，請?jiān)谫徺IELISA試劑盒的時(shí)候注意,，需要做多少個樣本，在決定買多大規(guī)格的試劑盒,，以免做實(shí)驗(yàn)時(shí)出現(xiàn)試劑盒不夠用或者浪費(fèi),！

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