植物辣椒環(huán)斑病毒(ChiRSV)elisa試劑盒

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       ELISA方法的基本原理是：①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性,。②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體,，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性,。在測定時(shí),，把受檢標(biāo)本(測定其中的抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開,，zui后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例,。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān),，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高,，故可極大地地放大反應(yīng)效果,，從而使測定方法達(dá)到很高的敏感度。因此,，ELISA檢測是一項(xiàng)定位,、定性和定量(敏感度可達(dá)每毫升ng~pg水平)的綜合技術(shù)。常用的酶是辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(AKP)

 ELISA樣本準(zhǔn)備及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心,。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心,。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。胸腹水,、腦脊液參照實(shí)行,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時(shí)，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

植物辣椒環(huán)斑病毒(ChiRSV)elisa試劑盒

操作注意事項(xiàng)：

● 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存,。

● 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì),。

● 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。

● 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時(shí),，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

● 底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

● 加入試劑的順序應(yīng)*，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。

● 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),，本公司概不負(fù)責(zé),。

2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),。

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