植物濾紙酶(FPase)elisa試劑盒

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ELISA法是免疫診斷中的一項新技術,，現已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據已經使用的結果,，認為ELISA法具有靈敏、特異,、簡單,、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調查,。本法不僅可以用來測定抗ti,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,，

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產生的一切后果,，由實驗者承擔，本公司概不負責,。

2. 嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔,。

3. 產品特點

一,、高效,、靈敏、特異的抗ti,；

二,、穩(wěn)定的重復性和可靠性；

三,、吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體,；

四,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型,；

五,、節(jié)省實驗經費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度,，損失越少,，回收率越高，如果作標液1PPM,，就是1毫克/升,，而作出標準數據為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%,，這個與真實成分有密切的關系,，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定,，樣品水中含有無機氯20mg/L,，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品,，測定時忽略體積變化，如果測定出樣品中無機氯為29.8mg/L,，則認為回收率為99%,。

植物濾紙酶(FPase)elisa試劑盒

組成結構

1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內du素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離,。

2,、血漿：EDTA,、檸檬suan鹽、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。

3、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4,、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液,。

5、保存：如果樣品不立即使用,，應將其分成小部分-70℃保存,，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試劑盒成分

1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2 酶標記抗ti: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

3 標準品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5 標記抗ti稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7 終止液: 1N硫suan 12mL x 1

8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標準品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記抗ti和顯色劑)

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結

c. 洗去多余待測檢體,，加入另一種對抗原專一的一次抗ti,，與待測抗原進行鍵結

d. 洗去多余未鍵結一次抗ti，加入帶有酶的二次抗ti,，與一次抗ti鍵結

e. 洗去多余未鍵結二次抗ti,，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

原理：針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標抗ti,，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物,。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗ti，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余的抗原,。

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的一次抗ti,，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結,。

c. 洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗ti,，與待測的一次抗ti鍵結,。

d. 洗去多余未鍵結二次抗ti,，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值）,，以評估有色終產物的含量即可測量待測抗ti的含量,。

原理：利用酶標記的抗抗ti以檢測已與固相結合的受檢抗ti。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,，一般用于檢測小分子抗原,，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結

c. 加入帶有酶的抗原,，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數量有限,，因此當檢體中抗原的量越多,，則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗ti就越少，亦即,，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗ti鍵結,，即所謂競爭法之由來。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,，加入酶底物使酶呈色,，當檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內留下之帶有酶的抗原越少,，顯色也就越淺,。

e. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時,，一般會考慮使用競爭法ELISA,。

常見問題解析：

1、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,，但是在檢測之前還應該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍,。

2、加樣中可能遇到的問題,。

3,、洗板時容易造成誤差。

4,、顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長,，都有可能造成顯色劑不顯色。

5,、終止反應：在加終止劑的時候由于傾倒速度快，產生氣泡,，造成假陽性結果,，所以在倒終止劑的時候要緩慢倒,。

6、讀板：讀板的時候首先應該保證板的清潔干凈,。

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