人αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術，現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定，根據(jù)已經(jīng)使用的結果,，認為ELISA法具有靈敏,、特異、簡單,、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,，也適合于血清流行病學調查。本法不僅可以用來測定抗ti,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,，所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領域的應用范圍日益擴大,，

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔,，本公司概不負責。

2. 嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作,，后果由實驗者承擔。

3. 產(chǎn)品特點

一、高效,、靈敏,、特異的抗ti；

二,、穩(wěn)定的重復性和可靠性,；

三、吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體,；

四,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標本類型,；

五,、節(jié)省實驗經(jīng)費。

elisa試劑盒回收率是反應待測物在樣品分析過程中的損失的程度,，損失越少,，回收率越高，如果作標液1PPM,，就是1毫克/升,，而作出標準數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%,，這個與真實成分有密切的關系,，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定,，樣品水中含有無機氯20mg/L,，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品,，測定時忽略體積變化,，如果測定出樣品中無機氯為29.8mg/L，則認為回收率為99%,。

人αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA試劑盒

實驗過程:

1.試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑,。實驗操作中請 使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2.加樣:加樣或加試劑時,，請注意在吸取標本/標準品,，酶結合物或底物時，第yi個孔與最hou-一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的“預孵育“時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性,。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品) 將控制在10分鐘內,如標本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣,。

3.孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內，酶標板加上蓋或覆膜,，以避免液體蒸發(fā);洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態(tài):同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度,。

4.洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,，同時要消除板底殘留的液體和手指印,，避免影響最hou的酶標儀讀數(shù)。

常見問題解析：

1,、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的,，但是在檢測之前還應該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍。

2,、加樣中可能遇到的問題,。

3、洗板時容易造成誤差,。

4,、顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長，都有可能造成顯色劑不顯色,。

5,、終止反應：在加終止劑的時候由于傾倒速度快，產(chǎn)生氣泡,，造成假陽性結果,，所以在倒終止劑的時候要緩慢倒。

6,、讀板：讀板的時候首先應該保證板的清潔干凈,。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的抗原，則其會與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結

c. 洗去多余待測檢體,，加入另一種對抗原專一的一次抗ti,，與待測抗原進行鍵結

d. 洗去多余未鍵結一次抗ti，加入帶有酶的二次抗ti,，與一次抗ti鍵結

e. 洗去多余未鍵結二次抗ti,，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結果

原理：針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標抗ti,，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結合物,。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗ti,，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原,。

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的一次抗ti，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結,。

c. 洗去多余待測檢體,，加入帶有酶的二次抗ti，與待測的一次抗ti鍵結,。

d. 洗去多余未鍵結二次抗ti,，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值）,，以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗ti的含量,。

原理：利用酶標記的抗抗ti以檢測已與固相結合的受檢抗ti。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,，一般用于檢測小分子抗原,，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結,，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數(shù)量有限,，因此當檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結的固著抗ti就越少,，亦即,，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗ti鍵結，即所謂競爭法之由來,。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,，加入酶底物使酶呈色，當檢體中抗原量越多,，代表塑膠孔盤內留下之帶有酶的抗原越少,，顯色也就越淺。

e. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原,，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時,，一般會考慮使用競爭法ELISA。

試劑和樣本的控制方法:

一,、試劑

1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關,我司嚴格按照國家標準進行生產(chǎn),已獲得國家承認的“三證",每一個產(chǎn)品都有對應的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必擔心會有過期的試劑,。我司的試劑,值得您選擇。

2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求,。

二,、樣本

1.內源性干擾因素:包括類因子,、補體、高濃度的非特異免疫球蛋白,、異嗜性抗體,、某些自身抗體等;

類因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②標本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;

③檢測抗原時,可用2-巰ji乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解;

補體的控制方法:

①用EDTA稀釋標本;

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;

2.外源性干擾因素:包括標本溶血、細菌污染,、保存時間過長或凝固不全等;

控制方法:采血時規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標本時采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,檢測時盡量采用新鮮標本;對于凝固不全的血標本可適當加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清,。

深圳瑞清生物信息科技有限公司的產(chǎn)品在相當寬的領域得到廣泛的應用，長期和各大高校,、研究機構,、工廠、企業(yè)等建立了深厚的合作關系,，我們的企業(yè)文化是為樹立行業(yè)的地位而不懈努力,，為科研事業(yè)貢獻綿薄之力！公司的核心價值是誠信為本,，為客戶提供高品質的產(chǎn)品,、為員工提供發(fā)展平臺、為社會創(chuàng)造更多價值,。

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