小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒

ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認為ELISA法具有靈敏、特異,、簡單,、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點,。不僅適用于臨床標本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此，也適合于血清流行病學調(diào)查,。本法不僅可以用來測定抗ti,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,，

免責聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗,，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實驗者承擔，本公司概不負責,。

2. 嚴格按照說明書操作,，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔,。

3. 產(chǎn)品特點

一,、高效、靈敏,、特異的抗ti,；

二、穩(wěn)定的重復性和可靠性,；

三,、吸附性能好，空白值低,，孔底透明度高的固相載體,；

四、適用血清,、血漿,、組織勻漿液、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標本類型,；

五,、節(jié)省實驗經(jīng)費。

elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,，損失越少,，回收率越高，如果作標液1PPM,，就是1毫克/升,，而作出標準數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%,，這個與真實成分有密切的關(guān)系,，說明方法的準確度。比如水中總無機氯含量測定,，樣品水中含有無機氯20mg/L,，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機氯標準樣品,，測定時忽略體積變化,，如果測定出樣品中無機氯為29.8mg/L，則認為回收率為99%,。

小鼠血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)ELISA試劑盒

操作注意事項

試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶wan全溶解后再使用,。

實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。

濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白,；按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,，最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作,。

所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法

手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次,。

自動洗板機：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min，洗板5次,。

操作步驟

從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

設(shè)置標準品孔和樣本孔,，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣ben稀釋ye40μL,；空白孔不加,。

除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗ti100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

棄去液體,，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液，靜置1min,，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原,，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的抗原,，則其會與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測檢體，加入另一種對抗原專一的一次抗ti,，與待測抗原進行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti,，加入帶有酶的二次抗ti，與一次抗ti鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti,，加入酶底物使酵素呈色,，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標抗ti，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標抗原結(jié)合物,。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗ti,，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的一次抗ti,，則其會與塑膠孔盤上的抗原進行專一性鍵結(jié)。

c. 洗去多余待測檢體,，加入帶有酶的二次抗ti,，與待測的一次抗ti鍵結(jié)。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti,，加入酶底物使酶呈色,，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值），以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗ti的含量,。

原理：利用酶標記的抗抗ti以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗ti,。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制，一般用于檢測小分子抗原,，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原,，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進行專一性鍵結(jié),，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數(shù)量有限，因此當檢體中抗原的量越多,，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少,，亦即，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗ti鍵結(jié),，即所謂競爭法之由來,。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色,，當檢體中抗原量越多,，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺,。

e. 當需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原,，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時，一般會考慮使用競爭法ELISA,。

常見問題解析：

1,、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個小時將試劑拿到常溫下進行解凍,。

2,、加樣中可能遇到的問題。

3、洗板時容易造成誤差,。

4,、顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長，都有可能造成顯色劑不顯色,。

5、終止反應(yīng)：在加終止劑的時候由于傾倒速度快,，產(chǎn)生氣泡,，造成假陽性結(jié)果，所以在倒終止劑的時候要緩慢倒,。

6,、讀板：讀板的時候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈。

訂購說明:

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