人白細(xì)胞介素1(IL-1)ELISA試劑盒

ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異,、簡單,、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點(diǎn),。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查,。本法不僅可以用來測定抗ti,，而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,，

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé),。

2. 嚴(yán)格按照說明書操作,，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),。

3. 產(chǎn)品特點(diǎn)

一,、高效、靈敏,、特異的抗ti,；

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；

三,、吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體,；

四,、適用血清、血漿,、組織勻漿液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類型,；

五,、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測物在樣品分析過程中的損失的程度,，損失越少,，回收率越高，如果作標(biāo)液1PPM,，就是1毫克/升,，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升，就是說你的回收率是99%,，這個與真實(shí)成分有密切的關(guān)系,，說明方法的準(zhǔn)確度。比如水中總無機(jī)氯含量測定,，樣品水中含有無機(jī)氯20mg/L,，取100mL被測水樣品，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,，測定時忽略體積變化,，如果測定出樣品中無機(jī)氯為29.8mg/L，則認(rèn)為回收率為99%,。

人白細(xì)胞介素1(IL-1)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)過程:

1.試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑,。實(shí)驗(yàn)操作中請 使用一次性的吸頭,避免交叉污染。

2.加樣:加樣或加試劑時,，請注意在吸取標(biāo)本/標(biāo)準(zhǔn)品,，酶結(jié)合物或底物時，第yi個孔與最hou-一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,，將會導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育“時間,從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。一次加樣時間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品) 將控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。

3.孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài):同時應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時間和溫度,。

4.洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響最hou的酶標(biāo)儀讀數(shù),。

常見問題解析：

1,、試劑的選擇：選擇優(yōu)良試劑大家都是知道的，但是在檢測之前還應(yīng)該提前半個小時將試劑拿到常溫下進(jìn)行解凍,。

2,、加樣中可能遇到的問題。

3,、洗板時容易造成誤差,。

4、顯色問題：使用了過期的顯色劑或者是顯色劑用過后放置時間太長,，都有可能造成顯色劑不顯色,。

5、終止反應(yīng)：在加終止劑的時候由于傾倒速度快,，產(chǎn)生氣泡,，造成假陽性結(jié)果，所以在倒終止劑的時候要緩慢倒,。

6,、讀板：讀板的時候首先應(yīng)該保證板的清潔干凈。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原,，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體，檢體中若含有待測的抗原,，則其會與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測檢體,，加入另一種對抗原專一的一次抗ti，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti,，加入帶有酶的二次抗ti,，與一次抗ti鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色,，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對抗原分子上2個不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標(biāo)抗ti,，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗ti,，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的一次抗ti,，則其會與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)。

c. 洗去多余待測檢體,，加入帶有酶的二次抗ti,，與待測的一次抗ti鍵結(jié),。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酶呈色,，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值）,，以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗ti的含量。

原理：利用酶標(biāo)記的抗抗ti以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗ti,。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制,，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié),，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數(shù)量有限,，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少,，亦即,，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗ti鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來,。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多,，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,，顯色也就越淺。

e. 當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原,，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時,，一般會考慮使用競爭法ELISA。

試劑和樣本的控制方法:

一,、試劑

1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴(yán)格把關(guān),我司嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),已獲得國家承認(rèn)的“三證",每一個產(chǎn)品都有對應(yīng)的生產(chǎn)批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產(chǎn)品,不必?fù)?dān)心會有過期的試劑,。我司的試劑,值得您選擇。

2.試劑的準(zhǔn)備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進(jìn)行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度較快地達(dá)到所需的溫度,以滿足后面的測定需求,。

二,、樣本

1.內(nèi)源性干擾因素:包括類因子、補(bǔ)體,、高濃度的非特異免疫球蛋白,、異嗜性抗體、某些自身抗體等;

類因子的控制方法:

①用F(ab)2替代完整的IgG;

②標(biāo)本用聯(lián)有熱變性IgG的固相吸附劑處理;

③檢測抗原時,可用2-巰ji乙醇加入到標(biāo)本稀釋液中使RF降解;

補(bǔ)體的控制方法:

①用EDTA稀釋標(biāo)本;

②56℃ 30 min加熱血清使C1q滅活;

2.外源性干擾因素:包括標(biāo)本溶血,、細(xì)菌污染,、保存時間過長或凝固不全等;

控制方法:采血時規(guī)范操作,采集的血液勿用力震蕩,以防溶血;收集標(biāo)本時采用無菌試管,經(jīng)檢測后再低溫凍存;保存時間不宜過久,檢測時盡量采用新鮮標(biāo)本;對于凝固不全的血標(biāo)本可適當(dāng)加入抗凝劑,并放入37℃水中1 h,待充分凝固后再離心分離血清。

深圳瑞清生物信息科技有限公司經(jīng)過數(shù)年的努力發(fā)展已迅速成為集產(chǎn)品研發(fā)、經(jīng)營為一體的專業(yè)化生物工程公司,。公司具有完善的實(shí)驗(yàn)技術(shù)開發(fā)平臺,，成熟的抗原,、抗體研發(fā)系統(tǒng),，熟練掌握各種酶聯(lián)技術(shù)，結(jié)合公司的研發(fā)團(tuán)隊(duì),，可以有效的保證公司產(chǎn)品強(qiáng)的穩(wěn)定性和高的準(zhǔn)確性,，同時又具有競爭力的價(jià)格。 公司主營ELISA試劑盒,，目前可以提供生化試劑,、分子生物學(xué)試劑及試劑盒，各種抗體及免疫學(xué)試劑盒,、實(shí)驗(yàn)耗材等多門類上萬種產(chǎn)品,，產(chǎn)品涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué),、免疫學(xué)等生命科學(xué)的各個領(lǐng)域,。