檢測原理

試劑盒采用雙抗原一-步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) ,。往預(yù)先包被病毒性腹瀉病毒抗ti的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并徹di洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在suan的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450NM波長下測定吸光度(OD值) ,，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中豬病毒性腹瀉病毒(BVDV) 的存在與否,。

樣品收集,、處理及保存方法

1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

2.血漿: EDTA,、檸檬suan鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

3.細(xì)胞上清液: 3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn) 離心10分鐘取上清。

5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,，請(qǐng)按一次用量分裝,，凍存于-20°C， 避免反

復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

自備物品

1.酶標(biāo)儀(450NM)

2.高精度加樣器及槍頭: 0.5-10UL、 2-20UL,、 20-200UL,、 200-1000UL

3.37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.試劑盒保存在2-8°C，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶完quan溶解后再使用,。

2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封(低溫干燥)保存,。

3.預(yù)處理后的樣本請(qǐng)按照操作步驟用樣ben稀釋ye適當(dāng)稀釋以達(dá)到試劑盒的的最jia檢測效果,。.

4.嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作,。

5.所有液體組分使用前充分搖勻,。

人可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISA試劑盒

常用方法：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測大分子抗原,，一般的操作步驟為:

a. 將具有專一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的抗原,，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測檢體，加入另一種對(duì)抗原專一的一次抗ti,，與待測抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti,，加入帶有酶的二次抗ti，與一次抗ti鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti,，加入酶底物使酵素呈色,，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標(biāo)抗ti，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物,。

2. 間接法

間接法常用于檢測抗ti,，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤上，完成后洗去多余的抗原,。

b. 加入待測檢體,，檢體中若含有待測的一次抗ti，則其會(huì)與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié),。

c. 洗去多余待測檢體，加入帶有酶的二次抗ti,，與待測的一次抗ti鍵結(jié),。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酶呈色,，藉儀器（ELISA reader）測定塑膠盤中的吸光值（OD值）,，以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗ti的含量。

原理：利用酶標(biāo)記的抗抗ti以檢測已與固相結(jié)合的受檢抗ti,。

3. 競爭法

競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制,，一般用于檢測小分子抗原，其操作步驟為：

a. 將具有專一性的抗ti固著于塑膠孔盤上,，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測檢體,，使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原，此抗原也可與塑膠孔盤上的抗ti進(jìn)行專一性鍵結(jié),，由于塑膠孔盤上固著的抗ti數(shù)量有限,，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少,，亦即,，兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗ti鍵結(jié)，即所謂競爭法之由來,。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,，加入酶底物使酶呈色,，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,，顯色也就越淺,。

e. 當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤上時(shí),，一般會(huì)考慮使用競爭法ELISA,。

免責(zé)聲明：

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé),。

2. 嚴(yán)格按照說明書操作,，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),。

訂購說明:

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