檢測原理

試劑盒采用雙抗原一-步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) ,。往預(yù)先包被病毒性腹瀉病毒抗ti的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測抗原,，經(jīng)過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在suan的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450NM波長下測定吸光度(OD值) ,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中豬病毒性腹瀉病毒(BVDV) 的存在與否,。

樣品收集、處理及保存方法

1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2.血漿: EDTA,、檸檬suan鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.細(xì)胞上清液: 3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn) 離心10分鐘取上清,。

5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20°C,， 避免反

復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑盒性能

1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900,。

2. 靈敏度：最di檢測濃度小于0.1 U/mL。

3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。

4. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于15%。

5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存,。

6. 有效期：6個月

人可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒

樣品收集、處理及保存方法

1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2.血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)：

1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存,。

2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存，以免變質(zhì),。

3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用,。

4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6）洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

7）底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

8）加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。

9）按照說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。