小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒

ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,，根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,，認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異,、簡(jiǎn)單,、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn),。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,，而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此，也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查,。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗ti,，而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原，所以也是一種早期診斷的良好方法,。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,，

免責(zé)聲明

1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果,，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé),。

2. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作,，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書(shū)操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),。

3. 產(chǎn)品特點(diǎn)

一,、高效、靈敏,、特異的抗ti,；

二、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性,；

三,、吸附性能好，空白值低,，孔底透明度高的固相載體,；

四、適用血清,、血漿,、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型,；

五、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi),。

elisa試劑盒回收率是反應(yīng)待測(cè)物在樣品分析過(guò)程中的損失的程度,，損失越少，回收率越高,，如果作標(biāo)液1PPM,，就是1毫克/升，而作出標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)為0.99毫克/升,，就是說(shuō)你的回收率是99%,，這個(gè)與真實(shí)成分有密切的關(guān)系，說(shuō)明方法的準(zhǔn)確度,。比如水中總無(wú)機(jī)氯含量測(cè)定,，樣品水中含有無(wú)機(jī)氯20mg/L，取100mL被測(cè)水樣品,，加入0.1mL濃度為10mg/mL的含無(wú)機(jī)氯標(biāo)準(zhǔn)樣品,，測(cè)定時(shí)忽略體積變化，如果測(cè)定出樣品中無(wú)機(jī)氯為29.8mg/L,，則認(rèn)為回收率為99%,。

小鼠載脂蛋白A1(apo-A1)ELISA試劑盒

ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)：

1）試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存。

2）實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。

3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。

4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

6）洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。

7）底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

8）加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。

9）按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間,、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

ELISA試劑盒樣品收集,、處理及保存方法：

1）血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2）血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3）細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4）組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘，取上清液

5）保存------如果樣品不立即使用,，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。

常用方法及原理如下：

1. 夾心法：

夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原,，一般的操作步驟為:

a. 將具有專(zhuān)一性的抗ti固著（coating）于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體,，檢體中若含有待測(cè)的抗原,，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 洗去多余待測(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專(zhuān)一的一次抗ti,，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)

d. 洗去多余未鍵結(jié)一次抗ti,，加入帶有酶的二次抗ti，與一次抗ti鍵結(jié)

e. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti，加入酶底物使酵素呈色,，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果

原理：針對(duì)抗原分子上2個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗ti分別作為固相抗ti和酶標(biāo)抗ti,，將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物。

2. 間接法

間接法常用于檢測(cè)抗ti,，一般的操作步驟為：

a. 將已知的抗原固著于塑膠孔盤(pán)上,，完成后洗去多余的抗原。

b. 加入待測(cè)檢體,，檢體中若含有待測(cè)的一次抗ti，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié),。

c. 洗去多余待測(cè)檢體,，加入帶有酶的二次抗ti，與待測(cè)的一次抗ti鍵結(jié),。

d. 洗去多余未鍵結(jié)二次抗ti,，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤(pán)中的吸光值（OD值）,，以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗ti的含量,。

原理：利用酶標(biāo)記的抗抗ti以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗ti。

3. 競(jìng)爭(zhēng)法

競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制,，一般用于檢測(cè)小分子抗原,，其操作步驟為：

a. 將具有專(zhuān)一性的抗ti固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗ti

b. 加入待測(cè)檢體,，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)

c. 加入帶有酶的抗原,，此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗ti進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤(pán)上固著的抗ti數(shù)量有限,，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗ti就越少，亦即,，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤(pán)上抗ti鍵結(jié),，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。

d. 洗去檢體與帶有酶的抗原,，加入酶底物使酶呈色,，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤(pán)內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少,，顯色也就越淺,。

e. 當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗ti的抗原，或是不易得到足夠的純化抗ti以固著于孔盤(pán)上時(shí),，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA,。

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