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多肽合成方法
多肽是一種與生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能都相關(guān)的生物活性物質(zhì),，它的分子結(jié)構(gòu)介于氨基酸和蛋白質(zhì)之間,，是由多種氨基酸按照一定的排列順序通過(guò)肽鍵結(jié)合而成的化合物,。多肽是涉及生物體內(nèi)各種細(xì)胞功能的生物活性物質(zhì)的總稱，常常被應(yīng)用于功能分析,、抗體研究,、尤其是藥物研發(fā)等領(lǐng)域。
1963年,，Merrifield提出了固相多肽合成方法(SPPS),，由于其合成方便，迅速,，成為多肽合成的方法,，而且?guī)?lái)了多肽有機(jī)合成上的一次革命，并成為了一支獨(dú)立的學(xué)科——固相有機(jī)合成,，固相合成的發(fā)明同時(shí)促進(jìn)了肽合成的自動(dòng)化,。一臺(tái)真正意義上的多肽合成儀出現(xiàn)在1980年代初期。
運(yùn)行原理
多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理,，在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序（序列,，一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端）不斷添加、反應(yīng),、合成,，操作最終得到多肽載體。固相合成法,，大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度,。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生，參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是保護(hù)的,。羧基端是游離的,，并且在反應(yīng)之前必須活化。固相合成方法有兩種,，即Fmoc和tBoc,。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢(shì)，現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成,，但對(duì)于某些短肽,，tBoc因其產(chǎn)率高的優(yōu)勢(shì)仍然被很多企業(yè)所采用。
具體合成由下列幾個(gè)循環(huán)組成：
1） 去保護(hù)：Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑（piperidine）去 除氨基的保護(hù)基團(tuán),。
2） 激活和交聯(lián)：下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化,。活化的單體與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián),，形成肽鍵,。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán)：這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成,。
3） 洗脫和脫保護(hù)：多肽從柱上洗脫下來(lái),，其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑（TFA） 洗脫和脫保護(hù)。
基本元件
反應(yīng)器
數(shù)百年來(lái)，制藥業(yè)的反應(yīng)器/反應(yīng)釜 設(shè)備以玻璃材質(zhì)常見(jiàn),，因其透明且耐腐蝕,，而被眾多化學(xué)、生物學(xué)專家沿用,。多肽合成的過(guò)程需要操作人員直觀監(jiān)測(cè),，同時(shí)合成后可進(jìn)行在線切割（切割試劑TFA的強(qiáng)腐蝕性對(duì)反應(yīng)器材質(zhì)有了極大限制），這些要求限制反應(yīng)器以玻璃材質(zhì)適用,。
玻璃材質(zhì)的反應(yīng)器在制造工藝上有極大的難度限制：①燒制工藝：磨口精度要求,，正如很多國(guó)產(chǎn)設(shè)備都無(wú)法達(dá)到要求出現(xiàn)漏液漏氣現(xiàn)象，玻璃壁均勻程度等,。②配合攪拌柄以及密封裝置的成套加工工藝③防爆處理
氨基酸儲(chǔ)罐
溶劑儲(chǔ)罐
量筒
轉(zhuǎn)液瓶
感應(yīng)器
多端觸發(fā)器自感應(yīng)定量量取法,，直觀、科學(xué),、相對(duì)誤差,。
廢液桶
廢液桶通常選擇容積較大的HDPE桶，保證通風(fēng)良好,，同時(shí)需安裝感應(yīng)器裝置時(shí)刻檢測(cè)廢液情況,，避免溢出。
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