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         標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.296-2023的前身是GB 5009.82-2016,現(xiàn)在食品中維生素A,、E繼續(xù)使用標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.82-2016，維生素D單獨(dú)實(shí)行標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.296-2023,。本文將重點(diǎn)介紹GB 5009.296-2023標(biāo)準(zhǔn)中3個(gè)方法實(shí)驗(yàn)中的注意要點(diǎn),，與大家分享與交流。

        在方法解讀之前,，可以先了解下維生素D來源和性質(zhì),，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中才能更好的提取目標(biāo)物。

一,、維生素D的來源：

二,、維生素A、D,、E性質(zhì)

三、第一法 正相色譜凈化-反相液相色譜法的注意要點(diǎn)

1,、取樣量嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)的不同基質(zhì)的取樣量,，因?yàn)楦煞üに嚕恿可贂?huì)影響均勻性,。

2,、上機(jī)前，為了保護(hù)正向硅膠柱,，提取液水洗后,，必須用無水硫酸鎂鈉粉末脫水至無水狀態(tài)。

3,、為保證儀器靈敏度,，正向色譜進(jìn)樣量：500μL；反相色譜進(jìn)樣量：100μL;

4,、濃縮時(shí),，大體積石油醚待濃縮液，可選用萊奧12位全自動(dòng)氮吹濃縮儀,，可支持自動(dòng)定容到1ml,，再氮吹到近干；大體積氮吹時(shí),，實(shí)驗(yàn)員可解放雙手,，無需值守，并且確保氮吹不會(huì)吹到干,。防止維生素D附著壁上,，影響回收率,。

Leowlab SmartVap N12

萊奧12位全自動(dòng)定量濃縮儀

5、內(nèi)標(biāo)法和外標(biāo)法的選擇,？首先確定樣品是否含有維生素D2和D3.

四,、第二法 在線柱切換-反相液相色譜法的注意要點(diǎn)

1、關(guān)注儀器靈敏度問題,，根據(jù)取樣量,、定容體積、進(jìn)樣量,、檢測(cè)器靈敏度,、檢出限綜合考慮。

2,、固相萃取柱填料可選HLB,，重點(diǎn)要保證較大的柱容量，耐堿性,、耐壓性,，由于樣液皂化條件是堿性的，待凈化液屬于堿性,。

3,、標(biāo)準(zhǔn)提到的奶粉、油脂含量高的肉類,、粘稠的蜂蠟等制品屬于復(fù)雜類基質(zhì),，需要過柱壓力較大，選用萊奧48位正壓固相萃取儀,，針對(duì)以上復(fù)雜基質(zhì),，壓力相比真空泵負(fù)壓裝置，最高可達(dá)100psi,，可以輕松快速過柱,。

4、固相萃取可選擇萊奧48位正壓固相萃取儀,，可取代實(shí)驗(yàn)室常用的真空泵負(fù)壓萃取裝置,，能大大縮短萃取時(shí)間，提高萃取效率,，達(dá)到很好的平行性及回收率,。

Leowlab Purifier A48

萊奧48位正壓固相萃取儀

5、固相萃取儀后的液體,，加入適量水,，主要是克服色譜溶劑效應(yīng)，改善峰型；

6,、一維色譜柱可選用 PFP(五氟苯基)填料,，在同時(shí)分離生育酚異構(gòu)體時(shí)使用。

7,、二維色譜柱可選PAH(多環(huán)芳烴)或固醇類分析C18柱,。

8、捕集取柱可選C18或C8，粒徑可采用10μm填料，柱長(zhǎng)可選用到30mm

五,、第三法 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的注意要點(diǎn)

1,、選擇硅膠基質(zhì)的固相萃取柱,，需要注意防水，活化則選擇有機(jī)溶劑進(jìn)行活化。

2、同位素內(nèi)標(biāo)的選擇:維生素 D2-d3,、和維生素 D3-d3;，也可使用維生素D2-d6,。和維生素 D3;-d6,。可綜合考慮成本;

3.質(zhì)譜檢測(cè)的離子化效率的評(píng)估實(shí)驗(yàn)必須開展,，對(duì)于不同的基質(zhì),，樣品是不一樣的。

4.質(zhì)控樣品的跟進(jìn)是必要的,，才能驗(yàn)證做的樣本結(jié)果的準(zhǔn)確性。

5,、標(biāo)準(zhǔn)提到的奶粉,、油脂含量高的肉類、粘稠的蜂蠟等制品屬于復(fù)雜類基質(zhì),，需要過柱壓力較大,，選用萊奧48位正壓固相萃取儀，針對(duì)以上復(fù)雜基質(zhì),，壓力相比真空泵負(fù)壓裝置,，最高可達(dá)100psi，可以輕松快速過柱,。

Leowlab Purifier A48

萊奧48位正壓固相萃取儀

六,、關(guān)于我們

氮?dú)獍l(fā)生器

正壓固相萃取儀&氮吹儀

廣州萊奧實(shí)驗(yàn)室科技有限公司總部位于廣州,是一家專注于有機(jī)質(zhì)譜供氣及前處理儀器的高科技企業(yè)。

團(tuán)隊(duì)人員擁有十幾年的質(zhì)譜儀,、前處理儀器,、氮?dú)獍l(fā)生器從業(yè)經(jīng)歷。公司服務(wù)于全國食品、制藥,、臨床檢驗(yàn),、環(huán)境、司法鑒定,、科研院所等行業(yè),。