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樣品收集,、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后,，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝,。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.  細胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎,。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝,，凍存于-20℃,，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

實驗需自備物品有：

1.      酶標儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

豬瘟病毒E2蛋白 (CSFV-E2)ELISA檢測試劑盒操作注意事項：

1.  試劑盒保存在2-8℃,，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用,。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存。

3.  預處理后的樣本請按照操作步驟用稀釋液適當稀釋以達到試劑盒的的良好檢測效果。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間,、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻,。

96T豬瘟病毒E2蛋白 (CSFV-E2)ELISA檢測試劑盒組成及其配置：

①微孔酶標板（ 12 孔×8 條）,；

②陰性對照 0.5mL；

③陽性對照 0.5mL,；

④檢測抗原-HRP 10mL,；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL；

⑥稀釋液 6mL,；

⑦底物 A 6mL,；

⑧底物 B 6mL；

⑨終止液 6mL,；

⑩封板膜 2 張,；說明書 1 份；自封袋 1 個.

結(jié)果判斷：

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；

陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性