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大鼠嘔吐毒素（DON）ELISA快速檢測(cè)試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被嘔吐毒素（DON）抗原的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的競(jìng)爭(zhēng)抗原,，經(jīng)過溫育并洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的嘔吐毒素（DON）呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度,。

大鼠嘔吐毒素（DON）ELISA快速檢測(cè)試劑盒組成：

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、1.25,、2.5,、5、10,、20 ppb

結(jié)果判斷

1.  15分鐘內(nèi)在波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值,；

2.  百分結(jié)合率計(jì)算：設(shè)S0管計(jì)數(shù)為B0，各標(biāo)準(zhǔn)管或樣品管計(jì)數(shù)為B,，非特異管計(jì)數(shù)為NSB,，則百分結(jié)合率計(jì)算公式如下：B/B0=(B－NSB)/(B0－NSB)×100%

3.  logit計(jì)算:各標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)或樣品管的logit值計(jì)算公式如下:logit=ln(B/B0)/(1－B/B0)

4.  將標(biāo)準(zhǔn)品的OD均值與標(biāo)準(zhǔn)品0點(diǎn)的OD均相除，為標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)的百分結(jié)合率,，在log-logit坐標(biāo)紙上繪圖,。

5.  Log-logit雙對(duì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線：坐標(biāo)紙上橫軸從左至右第一個(gè)1-9表示為第一個(gè)10進(jìn)位，第二個(gè)1-9表示為第二個(gè)10進(jìn)位,。第三個(gè)1-9表示為第三個(gè)10進(jìn)位,。坐標(biāo)紙縱軸為百分比（1-99），即各標(biāo)準(zhǔn)吸光值的百分結(jié)合率,。取一條通過各點(diǎn)的直線,。要求盡可能多的點(diǎn)在線上，同時(shí)剩余的點(diǎn)均勻分布在直線的兩邊,。樣品也同樣由吸光值計(jì)算百分結(jié)合率,，再從縱軸上的相應(yīng)結(jié)合率找到直線上的點(diǎn)，此點(diǎn)對(duì)應(yīng)的橫坐標(biāo)濃度即為樣品的濃度,，無須換算,。

6.  人工處理：以標(biāo)準(zhǔn)濃度取log值為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的logit值為縱坐標(biāo)在普通坐標(biāo)紙上或以標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo),，對(duì)應(yīng)的B/B0為縱坐標(biāo)在logit-log坐標(biāo)紙上畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線（理想化時(shí)是一條直線）,。根據(jù)待測(cè)樣

品的B/B0可以從坐標(biāo)紙上查出樣品的濃度值,。如果使用普通坐標(biāo)紙,，查出的數(shù)值應(yīng)取反對(duì)數(shù)才是最后的濃度值。

7.  自動(dòng)處理：使用logit-log或四參數(shù)數(shù)據(jù)處理模式,，由電腦自動(dòng)計(jì)算得出結(jié)果,。

8.  敏感度：0.25 ppb