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人抗蛋白C抗體(aPC)ELISA檢測(cè)試劑盒 定性在國(guó)內(nèi)眾多實(shí)驗(yàn)室被廣泛使用,，深受廣大科研者的好評(píng)。上海軒澤康生物專(zhuān)ye供應(yīng)酶聯(lián)免疫分析試劑盒,，部分現(xiàn)貨供應(yīng)產(chǎn)品有人,、大鼠、小鼠,、兔,、豬、犬,、雞,、猴、植物等ELISA試劑盒,。所有elisa試劑盒均提供免費(fèi)代測(cè),，實(shí)驗(yàn)全程提供技術(shù)指導(dǎo),。歡迎咨詢,、訂購(gòu)！

一.   檢測(cè)原理：試劑盒采用一步間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被抗原的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌,。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中人抗蛋白C抗體（aPC）的存在與否,。

二. 96T試劑盒組成及其配置：

①微孔酶標(biāo)板（ 12 孔×8 條）；

②陰性對(duì)照 0.5mL,；

③陽(yáng)性對(duì)照 0.5mL,；

④檢測(cè)抗原-HRP 10mL；

⑤20×洗滌緩沖液 25mL,；

⑥稀釋液 6mL,；

⑦底物 A 6mL；

⑧底物 B 6mL,；

⑨終止液 6mL,；

⑩封板膜 2 張,；說(shuō)明書(shū) 1 份；自封袋 1 個(gè).

備注：20×洗滌緩沖液的稀釋?zhuān)赫麴s水按 1：20 稀釋?zhuān)?1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的蒸餾水,。

三. 人抗蛋白C抗體(aPC)ELISA檢測(cè)試劑盒 定性操作步驟:

①?gòu)氖覝仄胶?20min 后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回 4℃。

②設(shè)置陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔,，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照各 50μL,；

③待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加稀釋液 40μL,；

④隨后陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min,。

⑤棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

⑥每孔加入底物 A,、B 各 50μL,，37℃避光孵育 15min。

⑦每孔加入終止液 50μL,，15min 內(nèi),，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值。

四. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：

①試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔 OD 值平均值≥1.00,； 陰性對(duì)照孔 OD 值平均值≤0.15,。

② 臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

③陰性判斷：樣品 OD 值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

④陽(yáng)性判斷：樣品 OD 值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽(yáng)性

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