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試劑的準(zhǔn)備：20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水,。

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。

2.  自動洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。

科研雞血紅蛋白(Hb)測定試劑盒ELISA操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加稀釋液40μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

科研雞血紅蛋白(Hb)測定試劑盒ELISA實(shí)驗(yàn)中問題解答：

【檢測的結(jié)果沒有吸光度值或吸光度值很低】

可能造成的原因：1.使用的試劑盒已過有效期 2. 沒有充分回溫,、孵育的溫度太低

上海軒澤康生物為您解答：建議更換有效期以內(nèi)的試劑盒,，使用同一批次試劑盒內(nèi)的內(nèi)容物并嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行操作。在實(shí)驗(yàn)操作的整個過程中仔細(xì)觀察恒溫箱的溫度,。

【吸光度值偏高】

可能造成的原因：孵育溫度過高,，反應(yīng)時間過長,。

上海軒澤康生物為您解答：建議調(diào)整孵育環(huán)境的溫度，如無法調(diào)整室內(nèi)溫度請將顯色時間適當(dāng)縮短,，控制反應(yīng)時間。

【陰性樣本的吸光度值低】

可能造成的原因：酶標(biāo)板孔中的試劑未充分的混和

上海軒澤康生物為您解答：注意操作的方法,，注意洗滌時的方法,。