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植物3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒樣品收集方法:

【組織勻漿】:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織,，剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融,。 將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

【細(xì)胞培養(yǎng)上清】:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片,。取上清檢測(cè),。
注意事項(xiàng)：樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融,。  如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù)),。

植物3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)ELISA試劑盒使用指南：

步驟一：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒，室溫放置30分鐘以確保所有試劑穩(wěn)定,。

步驟二：根據(jù)待測(cè)樣本數(shù)量決定所需的板條數(shù),，把剩余的板條密封放回冰箱。

步驟三：分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔,、空白孔,、待測(cè)樣品孔（為避免實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔）,。

步驟四：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白孔中，空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水,。齊譽(yù)孔加入50ul的待測(cè)樣本,。

步驟五：標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣本孔各孔加入100ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）,。

步驟六：酶標(biāo)板用封板膜密封后放入濕盒于37℃恒溫孵育1小時(shí),。

步驟七：洗板。用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置15~30秒,，充分清洗酶標(biāo)板5次，用吸水紙拍干

步驟八：各孔分別加入底物A,、底物B 50ul（不用吹打）

步驟九：37℃避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液

步驟十：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值