【摘要】：信號(hào)素4A（Semaphorin 4A，簡(jiǎn)稱SEMA4A）是一種屬于信號(hào)素家族（semaphorin family）的蛋白質(zhì),，具有復(fù)雜的功能和多樣的生物學(xué)作用,。SEMA4A基因編碼可溶性和跨膜蛋白信號(hào)素家族的成員，其產(chǎn)物是一種單程I型膜蛋白,，包含免疫球蛋白樣C2型結(jié)構(gòu)域,、PSI結(jié)構(gòu)域和sema結(jié)構(gòu)域。SEMA4A在組織器官發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用,，并且在成人的大腦,、肺、腎、睪丸和脾臟中都有表達(dá),。此外,，它在皮膚、淋巴節(jié)點(diǎn)等20多種其他組織中也有廣泛表達(dá),。

實(shí)驗(yàn)需自備物品：

1.      酶標(biāo)儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

洗板方法：

1.  手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。

2.  自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。

樣品收集,、處理及保存：小鼠信號(hào)素4A(SEMA4A)科研ELISA試劑盒

【細(xì)胞培養(yǎng)上清】：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

【血清】：在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè),。

【血漿】：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

 【體液】：包括胸腹水、腦脊液,，分泌物等,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

 【樣本要求】：樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

 【樣本保存】：如果樣品不能立即檢測(cè),，應(yīng)將其分裝，-80 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中含大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

小鼠信號(hào)素4A(SEMA4A)科研ELISA試劑盒操作注意事項(xiàng)

1.  試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘,。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶溶解后再使用,。

2.  實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存,。

3.  濃度為0的S0號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白,；按照說明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋5倍，最終結(jié)果乘以5才是樣本實(shí)際濃度,。

4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間,、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻,。