檢測原理：試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被豬藍(lán)耳?。≒RRS）病毒抗原的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原,，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），與CUTOFF值相比較,，從而判定標(biāo)本中豬藍(lán)耳病抗體（PRRS-Ab）病毒的存在與否,。

樣品收集、處理及保存方法：

1.  血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清,。

3.  細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復(fù)凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

小鼠藍(lán)耳病抗體(PRRS-Ab)ELISA檢測試劑盒組成：

小鼠藍(lán)耳病抗體(PRRS-Ab)ELISA檢測試劑盒操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔,，陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL,；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰,、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗原100μL,，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

技術(shù)小提示：

1.      當(dāng)混合或重溶蛋白溶液時(shí),，盡量避免起沫。

2.      為了避免交叉感染,，配置不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品,、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭,。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽,。

3.      每次孵育時(shí)，請正確使用封板膠可保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,。

4.      混合后的顯色底物在上板前應(yīng)為無色,，請避光保存；假如微孔板后,，將由物色變成不同深度的藍(lán)色,。

5.      終止液上板順序應(yīng)同顯色底物上板順序一致；加入終止液后,，孔內(nèi)顏色由藍(lán)變黃,；若孔內(nèi)有綠色，則表明孔內(nèi)液體未混勻,；請充分混合,。