檢測前準備工作：

1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫,。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結晶,，屬于正常現象,；放置室溫,，輕搖均勻，待結晶溶解后再配置洗滌液,?？蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。

樣品收集、處理及保存方法：人成纖維細胞活化蛋白(FAP)ELISA試劑盒

1.  血清：使用不含熱原和內毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激,，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。

2.  血漿：EDTA,、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清,。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清,。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測,，請按一次用量分裝，凍存于-20℃,，避免反復凍融,，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品：

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL,、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱

人成纖維細胞活化蛋白(FAP)ELISA試劑盒操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL,，再加稀釋液40μL；空白孔不加,。

4.  除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值,。

ELISA實驗中一般需要4次加樣，即加標本,、加檢測抗體,、加底物和加終止液。實驗室使用的微量加樣器應注意保樣并定期校正,。ELISA比較敏感,，每孔加入液體量誤差會導致最后讀書差別，因此避免儀器帶來誤差,。上海軒澤康生物特為您準備加樣注意事項：

1.     加樣前：溶液應充分混勻,。加樣時避免90度向孔中滴加液體，否則會導致液體殘留再吸頭上,，從而導致加樣不準確,。正確的加樣方法應為45度,，吸頭貼著孔壁和液面的交界處加入,。

2.     加樣時：避免速度過快,，否則無法保證微量加樣的準確性和均一性；避免液體濺出,；

3.     加樣品時：單孔用量要求：≥50微升/指標,，如需要做2個復孔則血量≥100微升/指標,。

4.     每次加樣順序一致,，尤其底物、終止液順序一致,，保證每個孔顯色時間相同,。

5.     如果移液槍漏氣以至于加樣的量不夠,，不能用槍吸出再加，做相應記錄實驗,。