人前列腺素F2α(PGF2α)ELISA檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被前列腺素F2α（PGF2α）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的前列腺素F2α（PGF2α）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，計(jì)算樣品濃度,。

自備物品：

1.      酶標(biāo)儀（450nm）

2.      高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3.      37℃恒溫箱

人前列腺素F2α(PGF2α)ELISA檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

1.     樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細(xì)菌污染,。要注意避免出現(xiàn)溶血

2.     本公司提供的96孔酶標(biāo)板是單條可拆卸型酶標(biāo)板，用戶(hù)按需求使用,；剩余的酶標(biāo)板請(qǐng)按保存條件貯存,。在操作過(guò)程中避免酶標(biāo)板干燥，干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活,。

3.     洗板不正確能夠?qū)е虏坏男Ч?。在加入底物盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔單調(diào)掉,。

4.     任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的激烈氣體,。任何漂白成份都會(huì)損壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

樣品收集,、處理及保存：

1.  細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份,。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘,，收集上清,。

2.  細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,，通過(guò)反復(fù)凍融,，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎,，離心取上清液檢測(cè),。

3.  血清：在室溫下，血液自然凝固,，以1000×g離心15分鐘,，取上清待測(cè)。

4.  血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合后靜置10-20 分鐘后,，以1000×g離心15分鐘，收集上清,。

5.  體液：包括胸腹水,、腦脊液,，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,，以1000×g離心15分鐘,，收集上清。

6.  組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本,，稱(chēng)取重量0.5mg,，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器,，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,，以2000-3000 rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè),。