檢測原理：試劑盒采用一步間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被抗原的包被微孔中,，依次加入標本,、HRP標記的檢測抗抗體，經過溫育并洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF值相比較,，從而判定標本中犬皰疹病毒抗體（CHV-Ab）的存在與否。

犬皰疹病毒抗體(CHV-Ab)ELISA檢測試劑盒操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  設置陰、陽性對照孔和樣本孔,，陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL,；

3.  待測樣本孔先加待測樣本10μL,，再加稀釋液40μL；

4.  隨后陰,、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗原100μL,，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.  每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,，15min內,，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷：

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00,；

陰性對照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off）,，樣品為陽性

性能參數(shù)：96T/盒可檢測90個樣本；48T/盒可檢測42個樣本,。