檢測(cè)原理：試劑盒采用一步間接法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被抗原的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗抗體,，經(jīng)過(guò)溫育并洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值）,，與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中犬皰疹病毒抗體（CHV-Ab）的存在與否,。

犬皰疹病毒抗體(CHV-Ab)ELISA檢測(cè)試劑盒操作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔,，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照,、陽(yáng)性對(duì)照各50μL,；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加稀釋液40μL,；

4.  隨后陰,、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。

5.  棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值,。

結(jié)果判斷：

1.  試驗(yàn)有效性：陽(yáng)性對(duì)照孔OD值平均值≥1.00；

陰性對(duì)照孔OD值平均值≤0.15,。

2.  臨界值（Cut off）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off）,，樣品為陰性

4.  陽(yáng)性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽(yáng)性

性能參數(shù)：96T/盒可檢測(cè)90個(gè)樣本,；48T/盒可檢測(cè)42個(gè)樣本,。