l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中人生長激素釋放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）的含量。

l 有效期：6個(gè)月

l 保存條件：2-8℃

l 上海軒澤康生物有限公司提供

試劑盒組成：

備注：

1. （96T/48T）打開包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全,。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：1600,、800,、400,、200、100,、0 pg/mL

3. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),，標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi)，實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),，可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

檢測前準(zhǔn)備工作：

1. 請(qǐng)?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,，平衡至室溫,。

2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正?，F(xiàn)象,；放置室溫，輕搖均勻,，待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液,。可將20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,，未用完的放回4℃

3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋,，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。,。

實(shí)驗(yàn)原理：

試劑盒采用雙抗體二步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被人生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)捕獲抗體包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品孵育,，加入生物化抗體進(jìn)行抗體生物素化,，經(jīng)過溫育并*后加入HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人生長激素釋放肽ghrelin（GHRP-Ghrelin）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。

實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材：

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL,、2-20uL、20-200uL,、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

樣本處理及要求：

1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時(shí)或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測量結(jié)果）,，稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng)1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

5. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測。

6. 樣品外觀：樣品應(yīng)清澈透明,，懸浮物應(yīng)離心去除,。

7. 樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測,，請(qǐng)按一次使用量分裝,，凍存于-20℃（1個(gè)月內(nèi)檢測），或-80℃（6個(gè)月內(nèi)檢測）,，避免反復(fù)凍融,，標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測,。

注意事項(xiàng)：

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑,。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果,。

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射,。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。