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人白細胞介素22 (ELISA)試劑盒 |
實驗條件的選擇 在ELISA中,,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括: (1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,,在同一實驗條件下進行反應(yīng),,觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。 (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的最適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值最大而蛋白量最少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。 (3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取“方陣法"(包被物,、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。 (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全,、有明顯地顯色反應(yīng),,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,,應(yīng)注意防護,。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,,如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng),。通常底物作用時間,,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,,尤其是H2O2在臨用前加入,。 |
人白細胞介素22 (ELISA)試劑盒 |
應(yīng)用領(lǐng)域 ELISA法是免疫診斷中的一項新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病,、寄生蟲病及非傳染病等方面的免疫診斷,。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,,認為ELISA法具有靈敏,、特異、簡單,、快速,、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定抗體,,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴大,。 |
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