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大鼠Dickkopf 1 (ELISA)試劑盒 |
雙抗體夾心法
1. 包被:以 0.05 MPH 稀釋抗體至蛋白質(zhì)含量為 1-10 μg/ml,。 9. 含氧碳酸鹽涂層緩沖液。在 4 °C 下將 0.1 ml 添加到每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中過夜,。次日,,將溶液從孔中取出并用洗滌緩沖液洗滌3次,每次3分鐘。 (以下也清洗),。
2,、加樣:將0.1ml特定稀釋度的待測(cè)樣品加入上述包被的反應(yīng)液中,37℃孵育1小時(shí),。然后洗,。 (同時(shí)創(chuàng)建空白孔、陰性對(duì)孔和陽性對(duì)照孔),。
3. 酶標(biāo)抗體的加入:每個(gè)反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(滴定后稀釋)0.1ml,。在 37°C 下孵育 0.5-1 小時(shí)并洗滌。
4,、加入底物溶液顯色:在每個(gè)反應(yīng)孔中加入0.1ml臨時(shí)配制的TMB底物溶液,,37℃孵育10-30分鐘。
5. 反應(yīng)結(jié)束:每孔加入 0.05 ml 2M 硫酸,。
6,、結(jié)果評(píng)價(jià):在白色背景上可以用肉眼直接觀察結(jié)果。反應(yīng)孔越深,,陽性反應(yīng)越強(qiáng),,陰性反應(yīng)無色或極淡。表示“-"符號(hào),。您還可以測(cè)量 OD 值,。在 450 nm(ABTS 顯色時(shí)為 410 nm)使用 ELISA 檢測(cè)器,使用空白對(duì)照孔至零,,如果大于 OD 值的 2.1 倍,,則測(cè)量每個(gè)孔的 OD 值。陰性對(duì)照為陽性,。
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