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大鼠CD40配體 (ELISA)試劑盒
Elisa 生物檢測是一種實(shí)驗(yàn)性診斷方法,具有靈敏度高,、特異性強(qiáng),、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。 因其試劑穩(wěn)定,、易于儲(chǔ)存,、操作簡便、結(jié)果判斷客觀等特點(diǎn),,被廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)檢測的各個(gè)領(lǐng)域,。 ELISA檢測試劑盒適用于人血清或血漿中抗人戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗體ELISA檢測的體外定性檢測。
中文名稱ELISA試劑盒
外文名ELISA試劑盒
發(fā)表于 60 年代和 70 年代
特點(diǎn):試劑穩(wěn)定,、易儲(chǔ)存,、易操作。
操作方法
雙抗體夾心法
1. 包被:以 0.05 MPH 稀釋抗體至蛋白質(zhì)含量為 1-10 μg/ml,。 9.含氧碳酸鹽涂層緩沖液,。在 4°C 下將 0.1 ml 添加到每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中過夜。次日,,棄孔中溶液,,用洗滌緩沖液洗滌3次,每次3分鐘,。 (以下也稱為清掃),。
2、加樣:向上述包被好的反應(yīng)液中加入0.1ml的特定稀釋待測樣品,,37℃孵育1小時(shí),。然后洗。 (同時(shí)創(chuàng)建空白孔,、陰性對(duì)孔和陽性對(duì)照孔),。
3. 酶標(biāo)抗體的加入:每個(gè)反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(滴定后稀釋)0.1ml。在 37°C 下孵育 0.5-1 小時(shí)并洗滌,。
4,、加入底物溶液顯色:在每個(gè)反應(yīng)孔中加入0.1ml臨時(shí)配制的TMB底物溶液,37℃孵育10-30分鐘,。
5. 反應(yīng)結(jié)束:向每個(gè)反應(yīng)孔中加入 0.05 ml 2M 硫酸,。
6、結(jié)果的判斷:在白色背景上可以用肉眼直接觀察結(jié)果,。反應(yīng)孔越深,,陽性反應(yīng)越強(qiáng),,陰性反應(yīng)無色或非常淺。表示“-"符號(hào),。您還可以測量 OD 值,。用ELISA檢測器在450nm(ABTS顯色時(shí)為410nm),用空白對(duì)照孔調(diào)零,,如果大于OD值的2.1倍,,測量各孔的OD值。的陰性對(duì)照為陽性,。
間接法
1. 用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10 μg/ml,,每孔加入0.1 ml,4℃過夜,;
2.次日洗3次,;
3、在上述反應(yīng)孔中加入0.1ml稀釋的待測樣品(未知抗體),,37℃孵育1小時(shí),,洗滌;
4.(同時(shí)進(jìn)行空白,、陰性和陽性孔對(duì)照)反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的酶標(biāo)二抗0.1mL,;
5. 37°C孵育35-60分鐘,洗滌,;
6.' 最后用 DDW 洗滌,。
其余步驟同“Double Antibody Sandwich Methods"的4、5,、6,。
可概括四個(gè)方面:
1,、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位,。
2、研究抗酶抗體的合成,。
3,、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。
4,、定量檢測體液中抗原或抗體成份,。
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