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大鼠AMPA離子能谷氨酸受體1 （ELISA）試劑盒

預防措施

ELISA試劑盒檢測時的注意事項

1. ELISA 實驗的一般規(guī)則

1,、為保證移液槍的準確性,，誤差不能超過2%?？捎盟碗娮犹炱綔y定,。但最好請專業(yè)人士糾正。

2,、可配20ul,、50ul,、100ul、1000ul各一支槍,。吸出不同的液體后,，更換移液器吸頭。即使在吸氣標準時,。

3. 實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,，讓所有試劑回到室溫，使結果更穩(wěn)定,。

4. 實驗過程中,，基板應避光。

5,、用槍吸液體時,，速度不能太快，以免產生氣泡,，吸不準,。

6、吸液時,，請使用范圍接近所需量的槍,，以減少誤差。

7,、在酶標孔中加入液體時,，避免吸頭與孔內液體接觸，使吸頭上的液滴與孔壁接觸,，液滴自然流下,。

8. 加完所有液體后，平行輕輕搖動桌面上的ELISA板30秒,，使液體混合,。也可以使用酶標儀的搖動功能。

9. 溫水浴時,，用不干膠或膠帶紙將ELISA板密封,，防止水分蒸發(fā)。

10,、洗板時,，每次加入洗劑后，應靜置1分鐘,，使清洗更*,。如果沒有洗板機，請在除去液體后在報紙或羊毛紙上將盤子拍干,。

11,、當洗液不夠時,，可用蒸餾水配制PH7.4，0.02M磷酸鹽緩沖液,，加入0.1% Tween 20作為洗液,。加入1/1000的后可長期保存。

12,、基材對光敏感,，使用前應立即準備。

13,、檢測前,，打開酶標儀，使其穩(wěn)定10分鐘以上,。

14、底物有一定毒性,，終止液對皮膚有腐蝕性,，應盡量避免。

15,、待測樣品應澄清,，否則會影響結果。

16,、溫水浴時間應符合試劑盒規(guī)定,。

17、盡量做雙孔實驗,，以保證數據的準確性,。

18、結果有問題的樣品,，應采用其他方法確認,。

可以總結為四個方面：

1. 用于定位各種細胞內成分的免疫酶染色。

2.研究抗酶抗體的合成,。

3. 出現(xiàn)少量免疫沉淀,。

4、體液中抗原或抗體成分的定量檢測,。

二,、下面所提到的是針對我公司的ELISA產品會出現(xiàn)的問題及解決辦法

1. 加入反應終止液后，沒有吸光值或吸光值偏低,。

a.原因：未加入酶標記物,。

解決辦法：請按照操作步驟進行。

b.原因：試劑盒內容物未能充分回,。

解決辦法：確定試劑盒內容物回溫后再進行操作,。

c.原因：室溫太低,。

解決辦法：若室溫太低(<19℃)，請于操作步驟4,，適當延長溫育時間,。

d.原因：未使用試劑盒的清洗液清洗。

解決辦法： 請用試劑盒內所提供的清洗液清洗,。

e.原因：試劑盒已過有效期限,。

解決辦法：請更換成仍在有效期限內的試劑盒。

2. 標準曲線線性不佳,，或是平行性不好,。

a.原因：溫育位置避光不好或受到氣流干擾。

解決辦法： 請確認溫育位置既不透光也不透風(如抽屜內),。

b.原因：操作時間拖太久,。

解決辦法：請在方法熟練后再進行操作。

c.原因：微孔間相互污染,。

解決辦法： 加樣品時,，請小心勿濺出微孔外，以免造成其它微孔的污染,。

d.原因：標準品或酶標記物所加入的量不一致,。

解決辦法：請使用已校正過的移液槍，并確保其與吸頭之間有高度密合性,。

e.原因：添加樣品或試劑的操作方法不正確,。

解決辦法：加樣品或試劑時，吸頭請勿接觸微孔,。

f.原因：洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞,、洗完板后未立刻進行下一步驟)。

解決辦法：請隨時監(jiān)控洗板機洗板過程,，洗完后立即進行下一步驟,。

3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。

a.原因：室溫太高(>25℃),。

解決辦法： 若無法降低室內溫度,，請適當縮短步驟4的溫育時間。

b.原因：底物溶液受到污染,。

解決辦法： 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍色,，請不要再使用。

c.原因：反應時間超過太久,。

解決辦法：請控制反應時間,。

d.原因：酶標記物污染了盒內其它試劑。

解決辦法：使用過的吸頭應立即丟棄，可避免試劑間相互污染,，凡是試劑(特別是酶標記物與底物溶液)接觸過的容器應立即清洗干凈,。(先以漂白水浸泡，再以清水沖洗干凈,，可確保無殘留)

4. 陰性標準品的吸光值低于陽性標準品的吸光值,。

a.原因：微孔中的試劑未能充分混合。

解決辦法： 試劑加完后,，需輕敲盤四周使其充分混合均勻,。

b.原因：洗板過程發(fā)生問題(同2-f.)。

解決辦法：請參考2-f.

c.原因：添加樣品或酶標記物的量不一致,。

解決辦法： 請參考2-d.

該IBL試劑盒可用于小鼠血清,、EDTA血漿和細胞上清液中IL-6的定量檢測

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