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大鼠Agouti相關(guān)蛋白 (ELISA)試劑盒 |
大鼠Agouti相關(guān)蛋白 (ELISA)試劑盒
注意事項(xiàng) ELISA試劑盒檢測過程中的注意事項(xiàng) 一、ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則 1,、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,,誤差不能超過2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定,。但最好有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。 2,、要配備20ul,、50ul、100ul,、1000ul和排槍各一支,。吸取不同的液體后,要更換槍頭,。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。 3,、要在實(shí)驗(yàn)前1小時將試劑盒從冰箱中取出,,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定,。 4,、實(shí)驗(yàn)時,要使底物避光保存,。 5,、用槍吸取液體時速度不能太快,,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。 6,、吸取液體時,,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差,。 7,、將液體加到酶標(biāo)孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,,液滴會自然流下去。 8,、液體全部加完后,,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體,。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能,。 9、溫浴時,,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,,防止水分的蒸發(fā)。 10,、洗板時,,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,,使清洗更加*,。沒有洗板機(jī)時,倒去液體后,,要將酶標(biāo)板在報紙或毛紙上用力拍干,。 11、洗液不夠時,,可用蒸餾水自行配制PH7.4,,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液,。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存,。 12、底物是光敏感的,,要在臨用前現(xiàn)配,。 13、檢測前,,要打開酶標(biāo)儀,,使之穩(wěn)定10分鐘以上,。 14、底物有一定的毒性,,終止液對皮膚有腐蝕性,,應(yīng)盡量避免接觸。 15,、待檢樣品要澄清,,否則會影響結(jié)果。 16,、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定,。 17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),,這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,。 18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證,。 |
可概括四個方面:
1,、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
2,、研究抗酶抗體的合成,。
3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng),。
4,、定量檢測體液中抗原或抗體成份。
利用
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固定化和抗原或抗體的酶標(biāo)記,。固相載體表面結(jié)合的抗原或抗體仍保留其免疫活性,,而酶標(biāo)抗原或抗體同時保留其免疫活性和酶活性。在測量過程中,,測試樣品(其中的抗體或抗原)與固體支持物表面的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng),。在固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物通過洗滌與液體中的其他物質(zhì)分離。然后加入酶標(biāo)抗原或抗體,,也通過反應(yīng)與固相載體結(jié)合,。此時,固相上酶的量與樣品中被測物質(zhì)的量成正比,。加入酶反應(yīng)的底物后,,底物被酶催化成有色產(chǎn)物,產(chǎn)物的多少與樣品中被測物質(zhì)的多少直接相關(guān),,因此可以進(jìn)行定性或定量分析根據(jù)顏色深度。由于酶的高催化效率,,間接放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果,,并且該測定方法達(dá)到了高靈敏度,。 ELISA 可用于測量抗原和抗體。
組成結(jié)構(gòu)
1. 血清:手術(shù)過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。采血后,以 1000 x g 離心 10 分鐘,,快速小心地分離紅細(xì)胞,。
2、血漿:EDTA,、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測。通過以 1000 x g 離心 30 分鐘去除顆粒,。
3. 細(xì)胞上清:1000×g 離心 10 分鐘,,去除顆粒和聚集物。
4,、組織勻漿:加入適量生理鹽水打碎組織,。以 1000 × g 離心 10 分鐘并去除上清液。
5. 儲存:如果樣品不立即使用,,應(yīng)在-70℃下分小份儲存,,避免反復(fù)冷凍。盡量不要使用溶血或高脂血癥,。如果血清中含有大量顆粒,,請在測試前將其離心或過濾。不要在 37°C 或更高的溫度下解凍,。在室溫下解凍并確保樣品均勻*地解凍,。
該IBL試劑盒可用于小鼠血清、EDTA血漿和細(xì)胞上清液中IL-6的定量檢測
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