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人白細胞介素17C (ELISA)試劑盒 |
操作方法 雙抗體夾心法 1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,,4℃ 過夜,。次日,棄去孔內(nèi)溶液,,用洗滌緩沖液洗3次,,每次3分鐘。(簡稱洗滌,,下同),。 2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃ 孵育1小時,。然后洗滌,。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔),。 3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃ 孵育0.5~1小時,,洗滌,。 4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘,。 5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml,。 6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,,陽性程度越強,,陰性反應(yīng)為無色或極淺,,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+",、“-"號表示,。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,,則410nm)處,,以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,,即為陽性,。 人白細胞介素17C (ELISA)試劑盒 |
間接法 1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,,4℃過夜,; 2.次日洗滌3次; 3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,; 4.(同時做空白,、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,; 5.37℃孵育35-60分鐘,,洗滌; 6.’最后一遍用DDW洗滌,。 其余步驟同“雙抗體夾心法"的4,、5、6,。 |
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